Perfringens Agar Base, pożywka sypka

PODSTAWA AGAR PERFRINGENS (TSC I SFP)

Kod: CM0587

Podstawowa pożywka do stosowania samodzielnie lub ze środkami selektywnymi do wytwarzania agaru Tryptose Sulphite (TS), agaru Tryptose Sulphite Cycloserine (TSC) lub agaru Shahadi Ferguson Perfringens (SFP) do domniemanej identyfikacji i oznaczania Clostridium perfringens.

Typowa formuła * gm / litr

Tryptoza 15,0

Pepton sojowy 5.0

Ekstrakt drożdżowy 5.0

Pirosiarczyn sodu 1.0

Cytrynian żelazowo-amonowy 1.0

Agar 19,0

pH 7,6 ± 0,2 przy 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

WYBÓR SELEKTYWNY PERFRINGENS (SFP)

Kod: SR0093

Zawartość fiolki

SR0093E
(1 fiolka na 500 ml
średni)

na litr
Siarczan kanamycyny

6,0 mg
12,0 mg
Polimyksyna B.

15 000 IU
30 000 IU
 

WYBÓR SELEKTYWNY PERFRINGENS (TSC)

Kod: SR0088

Zawartość fiolki

SR0088E
(1 fiolka na 500 ml
średni)

na litr
D-cykloseryna

200,0 mg
400,0 mg

Sposób użycia 
Aby przygotować bazę agarową
Zawiesić 23 g w 500 ml wody destylowanej i delikatnie podgrzewać, aż agar całkowicie się rozpuści. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 10 minut. Pozwól medium ostygnąć do 50 ° C.

Przygotowanie agaru z tryptozą siarczynową i cykloserynową (agar TSC)
Do 500 ml bazy agarowej schłodzonej do 50 ° C dodaj uwodnioną zawartość 1 fiolki suplementu TSC (SR0088) i 25 ml emulsji z żółtka jaja (SR0047). Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.

Przygotowanie agaru bez żółtka jaja TSC
Do 500 ml bazy agarowej schłodzonej do 50 ° C dodaj uwodnioną zawartość 1 fiolki suplementu TSC (SR0088). Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.

Przygotowanie agaru Shahidi-Ferguson Perfringens (agar SFP)
Do 500 ml bazy agarowej schłodzonej do 50 ° C dodać nawodnioną zawartość 1 fiolki suplementu SFP (SR0093) i 25 ml emulsji żółtka jaja (SR0047) dobrze wymieszać i wlać do jałowych szalek Petriego.

Aby przygotować agar na nakładkę
W przypadku agaru TSC lub SFP stosowanego jako nakładka pomija się emulsję żółtka jaja (SR0047). Jego włączenie nie poprawia reakcji lecytynazy i zmniejsza widoczność kolonii.

Opis
Baza agarowa Perfringens (TSC i SFP) to pożywka, do której można dodać emulsję żółtka jaja (SR0047) i odpowiedni suplement antybiotykowy, aby otrzymać agar Shahidi-Ferguson Perfringens (SFP) 1 lub agar tryptozowy siarczynowy cykloseryny (TSC) 2 . Opisano agar TSC bez żółtka jaja4, który ma tę zaletę, że tworzą się mniejsze kolonie. Może to uprościć liczenie płytek o dużej liczbie kolonii.

Wykazano wyższą liczbę przy użyciu techniki nalewania. Uważano, że różnice wynikają z narażenia komórek Clostridium perfringens na wysokie napięcie tlenu w procedurze powlekania powierzchniowego4.
Agar Shahidi-Ferguson Perfringens oparty jest na formule opracowanej przez Shahidi i Fergusona1. Pożywka wykorzystuje siarczan kanamycyny (12 mg / l) i siarczan polimyksyny B (30 000 IU / l) jako środki selektywne, aby zapewnić wysoki stopień selektywności i swoistości wobec Clostridium perfringens. Agar z tryptozą siarczynową i cykloserynową opracowano przy użyciu tego samego podłoża podstawowego, co agar SFP2, ale z 400 mg / l D-cykloseryny jako środka selektywnego. Pirosiarczyn sodu i cytrynian amonowo-żelazowy są stosowane jako wskaźnik redukcji siarczynów przez Clostridium perfringens, który wytwarza czarne kolonie w obu ośrodkach.

Próby3 wykazały, że polimyksyna B i siarczan kanamycyny stosowane w agarze SFP pozwalają na większy odzysk zarówno komórek wegetatywnych, jak i zarodników Clostridium perfringens niż polimyksyna B i sulfadiazyna stosowane w agarze siarczynowo-polimyksynosulfadiazynowym lub neomycyna stosowana w agarze tryptonowo-siarczynowym. Jednak na agarze SFP znaleziono większą liczbę niespecyficznych kolonii.

W innym badaniu2 Serratia marcescens i Streptococcus lactis były jedynymi fakultatywnymi beztlenowcami, które rosły na agarze TSC, podczas gdy agar SFP umożliwiał także wzrost szczepów Enterococcus, Proteus i Enterobacter. Umożliwiło to jednak nieco wyższe tempo odzyskiwania Clostridium perfringens niż agaru TSC. Zarówno agar SFP, jak i agar TSC umożliwiły wzrost innych testowanych gatunków Clostridium redukujących siarczyny.

Niektóre szczepy Cl. perfringens może wytwarzać nieprzezroczystą strefę wokół kolonii z powodu aktywności lecytynazy, ale nie jest to uważane za uniwersalne dla wszystkich szczepów Clostridium perfringens po całonocnej inkubacji4, i obie czarne, lecytynazy pozytywne i czarne, kolonie negatywne lecytynazy należy uznać za domniemane Clostridium perfringens na agarach TSC lub SFP i przeprowadzonych testach potwierdzających. Fakultatywne beztlenowce z pozytywnym działaniem lecytynazy mogą rosnąć na agarze SFP, tworząc całkowicie nieprzezroczyste płytki, które maskują reakcję żółtka jaja Clostridium perfringens.

Technika

Przygotuj pożywkę zgodnie ze wskazówkami i przygotuj płytki zawierające około 20 ml podstawowej warstwy TSC lub SFP Agar zawierające żółtko jaja.
Przygotuj 0,1 ml podwielokrotności odpowiedniej serii rozcieńczeń zhomogenizowanej próbki testowej i rozprowadź na powierzchni warstwy podstawowej za pomocą sterylnego wacika. Nałóż dodatkowe 10 ml jajek