AGARA FIOLETOWA CZERWONO-BIELOWA GLUKOZA (VRBG) (ISO)
Kod: CM1082
Agar z fioletowo-czerwoną żółcią i glukozą (VRBGA) (ISO) służy do wykrywania i oznaczania liczby Enterobacteriaceae w żywności, paszach dla zwierząt i próbkach środowiskowych. Medium to spełnia kryteria formułowania i działania określone w ISO 215281.2 i ISO 11133: 20143.
Typowa formuła * gm / litr
Enzymatyczne trawienie tkanek zwierzęcych 7.0
Ekstrakt drożdżowy 3.0
Sole żółciowe nr 3 1.5
Chlorek sodu 5.0
Neutralny czerwony 0,03
Krystaliczny fiolet 0,002
Glukoza 10,0
Agar 12,0
pH 7,4 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 38,5 g odwodnionego podłoża VRBGA (ISO) w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia podczas mieszania. Kontynuuj gotowanie do 2 minut lub przez minimalny czas niezbędny do całkowitego rozpuszczenia. NIE AUTOCLAVE. Schłodzić do 44-47 ° C i zużyć w ciągu 4 godzin. Dobrze wymieszaj przed nalaniem.
Opis
Różne grupy bakterii lub poszczególnych gatunków są wykorzystywane w celu zapewnienia dowodów złej higieny, nieodpowiedniego przetwarzania lub zanieczyszczenia żywności po obróbce. Niektóre bakterie, takie jak Escherichia coli, są obecne w przewodzie pokarmowym wielu zwierząt, w tym ludzi, więc ich obecność można wykorzystać do wskazania potencjalnego zanieczyszczenia kałem.
Jedną z najczęstszych grup bakterii wykorzystywanych jako organizmy wskaźnikowe w przemyśle spożywczym są bakterie z grupy coli, które można uznać za podgrupę w obrębie Enterobacteriaceae. Jednakże, próbując poprawić ocenę bezpieczeństwa i jakości żywności przez przemysł spożywczy, nastąpił stopniowy ruch w kierunku testowania na całkowite Enterobacteriaceae, zamiast ograniczania testowania do coli. W żywności przetworzonej, szczególnie żywności poddanej obróbce cieplnej, organizmy te mogą zapewnić wiarygodne wskazanie niepowodzenia procesu, zanieczyszczenia przetwarzania lub zanieczyszczenia po obróbce.
Mossel i wsp. 3 zmodyfikowali agar laktozowy Violet Red Bile przez dodanie glukozy w celu poprawy odzyskiwania wszystkich Enterobacteriaceae. Późniejsze prace Mossel i Cowell4,5 wykazały, że laktozę można pominąć, co daje preparat znany jako VRBGA.
Enterobacteriaceae szybko fermentują glukozę, a tym samym obniżają pH podłoża, co powoduje powstanie kolonii w kolorze fioletowym / różowym z powodu włączenia neutralnego czerwonego wskaźnika i fioletu krystalicznego do podłoża. Kolonie te są zwykle otoczone fioletowymi aureolami wytrąconych soli żółciowych. Fiołek krystaliczny i sole żółciowe hamują wzrost flory Gram-dodatniej.
Technika
Zgodnie z ISO 11133: 20143 VRBGA (ISO) powinien zapewnić współczynnik produktywności ≥0,5 dla E. coli w porównaniu do tego samego inokulum hodowanego na pożywce referencyjnej (agar sojowy Tryptone). Agar VRBG (ISO) jest testowany zgodnie z wymaganiami ISO 11133: 20143. Certyfikaty jakości, wskazujące na testowane organizmy i produktywność, są dostępne dla każdej partii.
Pełne instrukcje można znaleźć w odpowiedniej standardowej metodzie. Poniżej znajduje się przegląd ISO 21528-2: 20042.
Przygotuj próbkę do przetestowania zgodnie z instrukcjami zawartymi w odpowiedniej części ISO 68877 lub, odpowiednio, w odpowiedniej normie.
Weź dwie szalki Petriego i przenieś do każdej 1,0 ml badanej próbki lub zawiesiny testowej. W razie potrzeby powtórz proces z dziesiętnymi rozcieńczeniami próbki.
W ciągu 15 minut dodaj około 10 ml stopionego VRGBA (ISO) w temperaturze 44–47 ° C. Ostrożnie wymieszaj podłoże z inokulum ruchami poziomymi i pozwól medium ostygnąć.
Po zestaleniu się agaru wlej dodatkowe 15 ml pożywki na powierzchnię zaszczepionej płytki, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się wzrostu.
Inkubować przez 24 ± 2 godziny w 37 ° C.
Policz całkowitą liczbę charakterystycznych kolonii. Enterobacteriaceae tworzą kolonie w kolorze fioletowym / różowym o średnicy większej niż 0,5 mm, zwykle otoczone aureolą.
Losowo wybierz pięć fioletowych / różowych kolonii do potwierdzenia.
Rozprowadzić na agarze odżywczym i inkubować w 37 ° C przez 24 ± 2 godziny. Wybierz dobrze izolowaną kolonię z każdej płytki w celu potwierdzenia za pomocą testów oksydazy i fermentacji.
Warunki przechowywania i okres ważności
VRBGA (ISO) należy przechowywać w szczelnie zamkniętym oryginalnym pojemniku w temperaturze 10–30 ° C. W przypadku przechowywania zgodnie z zaleceniami, nieotwarty produkt pozostanie stabilny do daty ważności wydrukowanej na opakowaniu.
Lokalnie przygotowane płytki VRBGA (ISO) mogą być przechowywane do 2 tygodni, jeśli są wykonane z CM1082 zgodnie z instrukcjami producenta i przechowywane w temperaturze 2-8 ° C, bez bezpośredniego światła słonecznego. Dłuższy okres trwałości może być osiągalny, ale należy go zweryfikować w odpowiednich lokalnych warunkach produkcji i przechowywania.
Wygląd
Medium odwodnione: słomkowo-różowy, sypki proszek
Przygotowane medium: fioletowy żel
