EE Broth (Buffered Glucose Brilliant Green Bile Broth), pożywka sypka

EE BULION

Kod: CM0317

Pożywka wzbogacająca dla Enterobacteriaceae w badaniu bakteriologicznym żywności.

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 10,0

Glukoza 5.0

Wodorofosforan disodowy bezwodny 6,45

Dwuwodorofosforan potasu 2.0

Oczyszczona wół żółć 20,0

Brilliant Green 0,0135

pH 7,2 ± 0,2 w 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia 
Dodaj 43,5 g do 1 litra wody destylowanej. Rozmieść 100 ml w 250 ml kolbach i ogrzewaj w 100 ° C tylko przez 30 minut. Ostudzić szybko w zimnej bieżącej wodzie. To medium jest wrażliwe na ciepło. NIE AUTOCLAVE.

Opis
Bulion EE (buforowana glukoza - genialny bulion z zieloną żółcią) jest zalecany jako pożywka wzbogacająca dla Enterobacteriaceae w badaniu bakteriologicznym żywności1 i pasz dla zwierząt2. Ta pożywka jest bardziej hamująca dla bakterii innych niż Enterobacteriaceae niż inne nieselektywne pożywki, np. Bulion z mannitolu 3 lub bulion z laktozy 4 ze względu na obecność w preparacie genialnych soli zielonych i żółciowych.

Wyliczenie Enterobacteriaceae ma ogromne znaczenie w monitorowaniu jakości sanitarnej żywności i leków, ale niezawodność zastosowanych metod zależy od resuscytacji uszkodzonych komórek. Takie osłabione komórki mogą wynikać z narażenia na odwodnienie, niskie pH i inne niekorzystne warunki5.

Inkubacja przez 2 godziny w dobrze napowietrzonym bulionie sojowym Tryptone CM0129 w 25 ° C powinna poprzedzać wzbogacanie w bulionie EE. Ta procedura jest zalecana w przypadku karmy suszonej6, pasz dla zwierząt7 i żywności pół-konserwowanej8. Czasami w przypadku konkretnego suchego produktu konieczny jest dłuższy okres inkubacji, ale nigdy ponad osiem godzin resuscytacji.

Bulion Oxoid EE opracowano w celu przezwyciężenia niezadowalających efektów hamowania na małą liczbę komórek Enterobacteriaceae z powodu zmian soli żółci. Włączenie oczyszczonej żółci wołowej wyeliminowało te problemy i można zastosować wstępny test do sprawdzenia wzrostu przez zaszczepienie około jednej żywej komórki na jednostkę podłoża9,10.

Do oceny bakteriologicznej przetworzonej żywności można wykorzystać całą grupę Enterobacteriaceae jako organizmy wskaźnikowe10. Pozwoli to przezwyciężyć rozbieżności, które mogą wystąpić, gdy obecne są enterobakterie z ujemną laktozą, beztlenowe pozytywne z laktozą lub późne fermentujące laktozę, ale brakuje ich w standardowych testach „coli-aerogenes”. Aby przezwyciężyć te problemy, laktozę zastąpiono mediami zawierającymi glukozę. Mossel i wsp. Cytowali kilka przykładów w literaturze, które odnosiły się do różnych pokarmów skażonych salmonellą, chociaż wyniki dla bakterii z grupy coli były negatywne. Późniejszy przykład cytowany przez Mossel9 dotyczył wybuchu biegunki spowodowanej francuskim fermentowanym pleśnią miękkim serem zanieczyszczonym serotypem O124 Escherichia coli. Organizm ten jest ujemny względem laktozy i dlatego nie został wykryty w testach bakterii z grupy coli, ale został rozpoznany tylko wtedy, gdy towar został przetestowany pod kątem Enterobacteriaceae, ponieważ szybko fermentował glukozę.

Bulion EE powinien być stosowany jako bulion wzbogacający w połączeniu z fioletowo-czerwonym żółciowym agarem glukozowym CM0485. Gdy wymagane są określone organizmy, a nie Enterobacteriaceae w ogólności, konieczne jest wykonanie subkultury na podłożu różnicowym z laktozą, np. Dezoksycholan, cytrynian agar CM0035, genialny zielony agar CM0263 lub MacConkey Agar CM0007 do wykrywania drobnoustrojów ujemnych lub opóźnionych.
Wielkość próbki nie powinna być mniejsza niż 10 g, aby uzyskać poszukiwane organizmy.

Technika
1. Resuscytować osłabione komórki przez inkubację rozcieńczeń 1:10 badanych próbek żywności w bulionie sojowym CM0129 Tryptone w temperaturze 25 ° C przez 2-8 godzin. Warstwa płynu nie powinna być dużo głębsza niż jeden centymetr. Wstrząsnąć kolbą, aby trzy razy zdyspergować zawartość naprzemiennie w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara i przeciwnie do ruchu wskazówek zegara przez 30 sekund.
2. Po upływie czasu niezbędnego do resuscytacji do resuscytowanych zawiesin dodaje się dziesięciokrotne objętości bulionu EE.
3. Wstrząśnij, aby zdyspergować jak wyżej. W przypadku dużych próbek pożądane jest dodanie ośrodka resuscytacyjnego zawierającego badany produkt do równych objętości bulionu EE o podwójnej mocy.
4. Inkubować w temperaturze 44 ° C przez 18 godzin w przypadku bakterii termotroficznych; 32 ° C przez 24/48 godzin dla bakterii mezofilnych; 4 ° C przez 10 dni dla bakterii psychrotroficznych w zależności od poszukiwanych grup Enterobacteriaceae.
5. Zbadaj probówki z bulionem i poszukaj mętności z pewną zmianą koloru w kierunku żółtawo-zielonej, aby uzyskać domniemane oznaki Enterobacteriaceae.
6. Subkultury mogą być wykonane na fioletowo-czerwonym żółciowym agarze glukozowym CM0485 lub na podłożach zawierających laktozę w celu potwierdzenia statusu LF lub NLF. Należy wykonać dalsze testy w celu potwierdzenia tożsamości izolatu.

Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.

Wygląd
Medium odwodnione: jasnozielony, sypki proszek
Przygotowane podłoże: roztwór w kolorze zielonym