Violet Red Bile Lactose Agar ISO, pożywka sypka

AGAR LAKTOZA CZERWONO-ŻÓŁTA (ISO)

KOD: CM0968

Agar Violet Red Bile Lactose (VRBL) (ISO) służy do wykrywania i liczenia bakterii z grupy coli w próbkach żywności, paszy dla zwierząt i środowisku. To medium spełnia kryteria formułowania i działania określone w ISO 4832: 20061 i ISO 11133: 2014.

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 7.0

Ekstrakt drożdżowy 3.0

Sole żółciowe nr 3 1.5

Chlorek sodu 5.0

Neutralny czerwony 0,03

Krystaliczny fiolet 0,002

Laktoza 10,0

Agar 12,0

pH 7,4 ± 0,2 w 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia 
Zawiesić 38,5 g odwodnionego podłoża agarowego VRBL (ISO) w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia podczas mieszania. Kontynuuj gotowanie do 2 minut lub przez minimalny czas niezbędny do całkowitego rozpuszczenia. NIE AUTOCLAVE. Schłodzić do 44-47 ° C i zużyć w ciągu 4 godzin. Dobrze wymieszaj przed nalaniem.

Opis
Metody dla organizmów wskaźnikowych lub indeksowych zapewniają proste podejście do rutynowych badań przesiewowych żywności. Oprócz bezpieczeństwa grupy wskaźników zapewniają miarę jakości żywności i potencjalnego zepsucia. Jedną z najczęstszych grup bakterii wykorzystywanych jako organizmy wskaźnikowe w przemyśle spożywczym są bakterie z grupy coli, które można uznać za podgrupę w obrębie Enterobacteriaceae.

Bakterie z grupy coli są zwykle definiowane przez ich zdolność do szybkiej fermentacji laktozy, wytwarzającej kwas i gaz, zwykle w ciągu 24 godzin. Rodzaje, które zwykle należałyby do tej grupy, to Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter i Escherichia, szczególnie Escherichia coli. Jednak gatunki należące do innych rodzajów, na przykład Erwinia i Serratia, mogą również fermentować laktozę, choć powoli, a niektóre szczepy Citrobacter i Klebsiella, a także Salmonella arizonae i Hafnia alvei, wykazują opóźnioną lub zmienną zdolność fermentacji.

Bakterie z grupy coli szybko fermentują laktozę w agarze VRBL (ISO), a zatem obniżają pH pożywki, wytwarzając czerwono-fioletowe kolonie, ze względu na włączenie neutralnej czerwieni i fioletu krystalicznego. Kolonie te są zwykle otoczone czerwono-fioletowymi aureolami wytrąconych soli żółciowych.

Fermentory inne niż laktoza lub późna laktoza wytwarzają słomiane lub bezbarwne kolonie z zielonkawymi aureolami. Inne pokrewne bakterie Gram-ujemne mogą rosnąć, ale można je stłumić przez inkubację w> 42 ° C lub inkubację beztlenową. Fiołek krystaliczny i sole żółciowe hamują wzrost flory Gram-dodatniej.

Technika
Zgodnie z ISO 11133: 2014 agar VRBL (ISO) powinien zapewniać współczynnik produktywności ≥0,5 dla E. coli w porównaniu do tego samego inokulum hodowanego na pożywce referencyjnej (agar tryptonowy Soya). Agar VRBL (ISO) jest testowany zgodnie z wymaganiami ISO 11133: 20142. Dla każdej partii dostępne są certyfikaty jakości wskazujące na testowane organizmy i wydajność.

Pełne instrukcje można znaleźć w odpowiedniej standardowej metodzie. Poniżej znajduje się przegląd ISO 4832: 20061.

Przygotuj próbkę do przetestowania zgodnie z instrukcjami zawartymi w ISO 68873 lub, odpowiednio, w odpowiedniej normie.
Weź dwie szalki Petriego i przenieś do każdej 1,0 ml badanej próbki lub zawiesiny testowej. W razie potrzeby powtórz proces z dziesiętnymi rozcieńczeniami próbki.
W ciągu 15 minut dodaj około 15 ml stopionego agaru VRBL (ISO) w temperaturze 44–47 ° C. Ostrożnie wymieszaj podłoże z inokulum ruchami poziomymi i pozwól medium ostygnąć.
Po zestaleniu się agaru wlać dodatkowe 4 ml pożywki na powierzchnię zaszczepionej płytki, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się wzrostu i osiągnąć warunki półtlenowe.
Inkubować przez 24 ± 2 godziny, odpowiednio, w 30 ° C lub 37 ° C. (Temperatura podlega uzgodnieniu między zainteresowanymi stronami. W przypadku mleka i przetworów mlecznych temperatura inkubacji wynosi 30 ° C.)
Policz całkowitą liczbę charakterystycznych kolonii. Bakterie z grupy coli tworzą kolonie o barwie ciemnoczerwonej do purpurowej o średnicy większej niż 0,5 mm, zwykle otoczone strefą fioletową, ale czasem bez. Są one uważane za typowe kolonie bakterii z grupy coli i nie wymagają dalszego potwierdzenia.
Policz i potwierdź także atypowe kolonie (np. Mniejszych rozmiarów) i wszystkie kolonie pochodzące z produktów mlecznych, które zawierają cukry inne niż laktoza.
Zaszczepić pięć kolonii każdego nietypowego typu, jeśli są dostępne, do probówek bulionu Brilliant Green Lactose Bile Bulion (CM0031) zawierającego probówkę Durham.
Inkubować probówki w 30 ° C lub 37 ° C (odpowiednio) przez 24 ± 2 godziny.
Kolonie wykazujące tworzenie się gazu w rurze Durham należy uznać za bakterie z grupy coli.
Warunki przechowywania i okres ważności
Agar VRBL (ISO) należy przechowywać w szczelnie zamkniętym oryginalnym pojemniku w temperaturze 10–30 ° C. W przypadku przechowywania zgodnie z zaleceniami, nieotwarty produkt pozostanie stabilny do daty ważności wydrukowanej na opakowaniu.

Lokalnie przygotowane płytki z agarem VRBL (ISO) mogą być przechowywane do 2 tygodni, jeśli są wykonane z CM0968 zgodnie z instrukcjami producenta i przechowywane w temperaturze 2-8 ° C, bez bezpośredniego światła słonecznego. Dłuższy okres trwałości może być osiągalny, ale należy go zweryfikować w odpowiednich lokalnych warunkach produkcji i przechowywania.

Wygląd
Medium odwodnione: słomkowo-różowy, sypki proszek