TRYPTONE BILE X-GLUCURONIDE MEDIUM (TBX)
Kod: CM0945
Selektywne, chromogenne podłoże do wykrywania i oznaczania liczby Escherichia coli w żywności i paszy dla zwierząt. Medium to spełnia kryteria formułowania i działania określone w ISO 166491,2,3 i ISO 11133: 20144.
Typowa formuła * gm / litr
Tryptone 20.0
Sole żółciowe nr 3 1.5
Agar 15,0
X-glukuronid 0,075
pH 7,2 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Kierunki
Zawiesić 36,6 g podłoża TBX w 1 litrze wody destylowanej. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Ochłodzić do 50 ° C i wlać pożywkę do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Pożywka TBX oparta jest na agarze tryptonowo-żółciowym (CM0595). Agar Tryptone Bile Agar został pierwotnie opracowany w celu ulepszenia wcześniejszych metod stosowanych do wykrywania Escherichia coli w żywności 5.6 pod względem szybkości, niezawodności, lepszego odzysku z zamrożonych próbek i wykrywania słabych fermentorów laktozowych.
Medium TBX wykorzystuje te zalety poprzez dodanie czynnika chromogennego - X-glukuronidu - który wykrywa aktywność glukuronidazy. Jest to ten sam enzym wykryty przez odczynnik MUG7, i wykazano, że jest wysoce specyficzny dla E. coli8. Jednak około 3-4% E. coli jest negatywnych pod względem glukuronidazy, szczególnie szczepy E. coli O1579.
Większość szczepów E. coli można odróżnić od innych bakterii z grupy coli dzięki obecności enzymu glukuronidazy. Chromogenem w pożywce TBX jest 5-bromo-4-chloro-3-indolilo-beta-D-glukuronid (X-glukuronid) i jest on przedmiotem działania tego enzymu. Komórki E. coli są w stanie wchłonąć ten nienaruszony kompleks, a wewnątrzkomórkowa glukuronidaza rozdziela wiązanie między chromoforem i glukuronidem. Uwolniony chromofor jest zabarwiony i gromadzi się w komórkach, powodując, że kolonie E. coli są zabarwione na niebiesko / zielono.
Technika
Wysuszyć powierzchnię podłoża przygotowanych płytek. Rozcieńczyć próbkę żywności zgodnie z zastosowaną metodą, na przykład 1:10, przy pomocy Maximum Recovery Diluent (CM0733). Homogenizuj w stomacher lub laboratoryjnym blenderze. W razie potrzeby dalej rozcieńcz próbkę.
Można zastosować następujące techniki inkubacji (kompletna metoda znajduje się w odpowiedniej normie):
1. Odmierzyć pipetą 0,1 ml homogenatu na płytkę i rozprowadzić na powierzchni za pomocą sterylnego rozpylacza. Inkubuj płytki przez 24 godziny w 37 ° C10.
2. Odmierzyć pipetą 0,5 ml homogenatu na płytkę i rozprowadzić na powierzchni za pomocą sterylnego rozpylacza. Inkubować płytki przez 4 godziny w 30 ° C, a następnie 18 godzin do 24 godzin w 44 ° C11.
3. Umieść membranę celulozową na powierzchni płytki z agarem glutaminianowym modyfikowanym minerałami. Odmierzyć pipetą 1 ml homogenatu na błonę. Inkubować przez 4 godziny w 37 ° C. Przenieść błonę na płytkę TBX i inkubować przez 18 do 24 godzin w temperaturze 44 ° C1.
4. Odmierzyć pipetą 1 ml homogenatu do sterylnej szalki Petriego. Dodaj pożywkę TBX, schłodzoną do 45 ° C. Dobrze wymieszaj i odstaw. Inkubować przez 18 do 24 godzin w 44 ° C. Jeśli podejrzewa się obecność komórek poddanych stresowi, należy wstępnie inkubować płytki przez 4 godziny w temperaturze 37 ° C2.
Pomnóż liczbę niebieskich / zielonych kolonii przez współczynnik rozcieńczenia i wyraż wynik jako liczbę E. coli na gram żywności.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki z medium przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: żel w kolorze słomy
