MRVP Medium, pożywka sypka

MRVP MEDIUM

Kod: CM0043

Pożywka zalecana do testów czerwieni metylowej i Vogesa-Proskauera do różnicowania grupy coli-aerogenes.

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 7.0

Glukoza 5.0

Bufor fosforanowy 5.0

pH 6,9 ± 0,2

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia
Dodaj 17 g do 1 litra wody destylowanej. Dobrze wymieszaj, rozprowadź w końcowych pojemnikach i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Opis
To podłoże glukozowo-fosforanowe jest zalecane w testach czerwieni metylowej i Vogesa-Proskauera w celu różnicowania grupy coli-aerogenes1.

Smith2 zauważył niską kwasowość produkcji kultur Enterobacter aerogenes w porównaniu z hodowlami Escherichia coli. Clark & ​​Lubs 3 zastosował czerwień metylową jako wskaźnik stężenia jonów wodorowych w celu różnicowania kultur peptonowo-fosforanowych w wodzie od członków grupy coli-duru brzusznego. Ten test, znany obecnie jako test czerwieni metylowej, rozróżnia organizmy zdolne do tworzenia dużych ilości kwasu z glukozy, tak że pH spada poniżej 4,4, oraz te organizmy, które nie mogą wytwarzać niskiego poziomu pH.

Różnicę wartości pH uwidacznia się poprzez dodanie do hodowli czerwieni metylowej ( pH 6,0 żółty).

Reakcja metylowo-czerwona

Kolor
Organizm
Pomarańczowy do czerwonego (MR dodatni)

Escherichia coli, Citrobacter spp. i inni

Pomarańczowy do żółtego (MR ujemny)

Enterobacter spp., Klebsiella pneumoniae i inne

Voges & Proskauer 4 opisał czerwone fluorescencyjne zabarwienie, które pojawiło się po dodaniu wodorotlenku potasu do kultur niektórych organizmów w pożywce glukozowej. Wykazano, że zabarwienie wynika z utlenienia diacetylu wytwarzającego acetylometylokarbinol, który reaguje z peptonem medium, dając czerwony kolor5,6. Durham7 zauważył, że Enterobacter aerogenes dało pozytywną reakcję, ale Escherichia coli nie wywołuje żadnych zabarwień, a później stało się jasne, że istnieje ujemna korelacja między testami czerwieni metylowej i testu Vogesa-Proskauera8,9 dla organizmów bakterii z grupy coli fermentujących laktozę.

Reakcja Vogesa-Proskauera

Czerwony (pozytywne)

Enterobacter spp. i inni

Bez koloru (negatyw)

Escherichia coli i inni

Technika
Zaszczepić 10 ml probówkę pożywki MRVP dwiema pętlami czystej, 4-6 godzinnej kultury peptonowej wody CM0009 testowanego organizmu.
Inkubuj nie mniej niż 48 godzin w temperaturze 35 ° C do testu MR, ale zwykle 3-5 dni w temperaturze 30 ° C. Ciężkie inokulum i 18-24 godzin inkubacji w 35 ° C może dać szybki wynik 10. Szybki test VP można przeprowadzić z ciężkiego inokulum i inkubacji w łaźni wodnej w 35 ° C przez 4-5 godzin. Niektóre organizmy (Hafnia alvei) wymagają inkubacji w 25 ° C, aby uzyskać pozytywny wynik testu VP.

Po inkubacji przetestuj jedną porcję bulionu za pomocą 5 kropli 0,4% wag./obj. Roztworu czerwieni metylowo-czerwonej i natychmiast odczytaj kolor na powierzchni podłoża.

Druga porcja bulionu jest używana do reakcji VP jedną z następujących metod:
1. Dodaj 3 ml 5% w / v alkoholowego roztworu a-naftolu i 3 ml 40% w / v roztworu KOH (metoda Barritt'a 12).
2. Dodaj śladową ilość kreatyny (2 krople 0,3% w / v roztworu) i 5 ml 40% roztworu KOH (metoda O’Meara13).
Po delikatnym wstrząśnięciu przez 30 sekund pojawi się jasny różowy lub eozynowy kolor. Kolor różowy jest dodatni; żaden kolor nie jest ujemny.
Barry & Feeney 14 uzyskał szybkie wyniki dodając kreatynę do odczynników Barritt.

Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże przechowuj w 2-6 ° C.

Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane podłoże: roztwór w kolorze słomy