EC BULION
Kod: CM0853
Selektywny bulion do wzrostu bakterii coli i Escherichia coli z próbek żywności i próbek środowiskowych.
Typowa formuła * gm / litr
Tryptone 20
Laktoza 5.0
Sole żółciowe nr 3 1.5
Fosforan dwu potasu 4.0
Fosforan mono-potasowy 1.5
Chlorek sodu 5.0
pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Rozpuścić 37 g w 1 litrze wody destylowanej. Wlać do końcowych pojemników i sterylizować w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.
Opis
Oryginalny preparat opisany przez Perry i Hajna1 z tryptozą jako źródłem azotu został następnie zastąpiony tryptonem. Wykazano, że podłoże jest niezawodnym podłożem dającym wiarygodne wyniki w ciągu 24 do 48 godzin2.
Bulion EC jest wybiórczym podłożem do różnicowania bakterii z grupy coli w kale oraz testu potwierdzającego na obecność Escherichia coli od próbek żywności i próbek środowiskowych3,4. Nadaje się również do wyliczenia przypuszczalnego E. coli w mleku i produktach mlecznych przy użyciu najbardziej prawdopodobnej techniki liczbowej2.
Escherichia coli jest powszechnym mikroorganizmem Gram-ujemnym, który może być obecny w próbkach żywności i wody. Obecność komórek E. coli może wskazywać na zanieczyszczenie kałem, chociaż ich spożycie niekoniecznie ma niekorzystny wpływ na zdrowie. Niemniej jednak niektóre szczepy są odpowiedzialne za biegunkę i mogą również prowadzić do poważniejszych chorób.
Obecność E. coli w wodzie jest również uważana za szczególny wskaźnik zanieczyszczenia kałem, ale brak metod szybkiej identyfikacji oznacza, że niespecyficzną grupę - bakterie z grupy coli w kale - stosuje się również jako wskaźnik takiego zanieczyszczenia. W związku z tym ważne jest, aby odróżnić bakterie z grupy coli pochodzenia kałowego od tych pochodzących z innych źródeł.
Kryterium identyfikacji bakterii z grupy coli i bakterii z grupy coli w kale jest fermentacja laktozy do kwasu i gazu w ciągu 24–48 godzin w temperaturze 44–45,5 ° C, w zależności od zastosowanej metody i / lub materiału:
Badanie skorupiaków 5 44,5 ° C
Mleko i przetwory mleczne 3 44,0 ° C
Woda i ścieki 4 44,5 ° C
Inne artykuły spożywcze 5 45,5 ° C
Kontrola jakości bulionu EC CM0853 obejmuje testowanie zgodnie z ISO 11133: 20146.
Technika
Preparat zawiera buforowany bulion laktozowy i sole żółciowe nr 3. Obecność soli żółciowych hamuje wzrost form zarodników i enterokoków, ale umożliwia wzrost E. coli i bakterii z grupy coli. Wytwarzanie gazu z fermentacji laktozy jest wskazane przy użyciu odwróconych probówek Durham. Metody są podsumowane poniżej, ale odnoszą się do odpowiedniego standardu dla szczegółowej techniki.
1. Mleko i przetwory mleczne / Domniemane E. coli3 (ISO)
Probówki zawierające odwrócone probówki Durham z pojedynczym i podwójnym bulionem Lauryl Tryptose (CM0451) zaszczepia się próbkami, jak opisano w metodzie standardowej. Inkubuj w 37 ° C przez 24-48 godzin i sprawdź pod kątem wydobycia gazu. Zaszczepić probówki wykazujące wytwarzanie gazu do nowej serii probówek zawierających 10 ml bulionu EC (CM0853) zawierających odwrócone probówki Durham i inkubować w temperaturze 44 ° C przez 24–48 godzin. Przenieść inokulum z probówek powodujących tworzenie się gazu do probówek zawierających wodę tryptonową (CM0087) i inkubować przez 24–48 godzin w temperaturze 44 ° C. Zbadaj pod kątem produkcji indolu i oblicz najbardziej prawdopodobną liczbę (MPN) przypuszczalnej E. coli. Aby uzyskać szczegółowe informacje, zapoznaj się z metodą standardową ISO.
2. Badanie bakterii z grupy coli w kale4 (APHA)
W celu różnicowania bakterii z grupy coli w kale zaszczepić bulion fermentacyjny EC (CM0853) zawierający odwrócone probówki Durham i inkubować w łaźni wodnej w temperaturze 44,5 ° C przez 24 ± 2 ° C godziny. Wytwarzanie i wzrost gazu w ciągu 24 godzin lub krócej uważa się za pozytywną reakcję coli z kałem. Aby uzyskać szczegółowe informacje, zapoznaj się ze Standardową Metodą APHA3.
3. Test potwierdzający na obecność E. coli5 (FDA / BAM)
Z każdej gazującej probówki Lauryl Tryptose Broth (CM0451) przenieś pętlę zawiesiny do probówek EC Broth (CM0853) zawierających odwrócone probówki Durham. Inkubować w 45,5 ° C i zbadać wytwarzanie gazu po 24 i 48 godzinach. Probówki do gazowania są pasmowane na agarze EMB (CM0069) i inkubowane w temperaturze 35 ° C przez 18–24 godzin. Przenieść 2 podejrzane kolonie z każdej płytki na PCA (CM0325), inkubować przez 18-24 godzin w temperaturze 35 ° C i potwierdzić testami morfologicznymi i biochemicznymi. Aby uzyskać szczegółowe informacje, zapoznaj się ze Standardową Metodą FDA / BAM4.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przechowuj przygotowane podłoże w temperaturze 2-8 ° C przez okres do 4 tygodni.
Wygląd
Pożywka odwodniona: biały, sypki proszek
Przygotowane podłoże: roztwór w kolorze słomy
