AGAR CZAPEK DOX (ZMODYFIKOWANY)
Kod: CM0097
stała pożywka do uprawy tych grzybów i bakterii, które są w stanie wykorzystać azotan sodu jako jedyne źródło azotu. Kwasowość pożywki można zwiększyć do hodowli organizmów kwasofilnych, takich jak drożdże.
Typowa formuła *gm / litr
Azotan sodu 2.0
Chlorek potasu 0,5
Glicerofosforan magnezu 0,5
Siarczan żelazawy 0,01
Siarczan potasu 0,35
Sacharoza 30,0
Agar 12,0
pH 6,8 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 45,4 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Dobrze wymieszaj przed nalaniem. W razie potrzeby skorygować reakcję do pH 3,5 ± 0,2, dodając 10 ml kwasu mlekowego 10% (SR0021) na litr po sterylizacji.
Opis
Agar Czapek Dox (zmodyfikowany) jest podłożem zawierającym azotan sodu jako jedyne źródło azotu, jest jednym z najbardziej użytecznych stałych pożywek do ogólnej uprawy grzybów.
W środowisku Oxoid glicerofosforan magnezu i siarczan potasu zastępują siarczan magnezu i fosforan potasu w oryginale. Ta modyfikacja zapobiega wytrącaniu się fosforanu magnezu. Podłoże jest również wysoce zadowalającym substratem do produkcji chlamydospor przez Candida albicans 1.
Dawson1 zastosował Oxoid Czapek Dox Agar (zmodyfikowany) w swojej technice do identyfikacji Candida albicans poprzez tworzenie chlamydospor w pierwotnej hodowli, używając wymazów pobranych z jamy ustnej i pochwy. Identyfikacja była zwykle możliwa w ciągu 24 godzin. Pożywka Oxoid wykazała dobrą produkcję chlamydosporu, podczas gdy oryginalny preparat nie. Po 24 godzinach inkubacji 23 z 27 szczepów Candida albicans utworzyły chlamydospory na agarze Oxoid Czapek Dox (zmodyfikowany), 21 na agarze do infuzji ryżu, 10 na agarze z kukurydzianym posiłkiem Oxoid (CM0103) i 10 na agarze z mąki kukurydzianej wykonanym w laboratorium. Po 48 godzinach 25 szczepów utworzyło chlamydospory zarówno na pożywce Oxoid, jak i na agarze ryżowym, 24 na agarze Oxoid Corn Meal Agar i 20 na pożywce laboratoryjnej. Dawson doszedł do wniosku, że pożywka Oxoid Czapek Dox i agar do wlewu ryżu były najbardziej zadowalającymi pożywkami. Żaden z 14 szczepów niezidentyfikowanych drożdży nie tworzył chlamydosporów na żadnym podłożu.
Smith2 przytoczył następujące zalecenia dotyczące stosowania agaru Czapek Dox Agar do badań taksonomicznych: Thom i Church3 dla Aspergillus; przez Thom4 i Raper i Thom5 dla Penicillium; i Wakesman6 dla promieniowców.
Technika
Ogólna uprawa
Aby uniknąć nadmiernej kondensacji schłodzić stopione medium do 50 ° C przed wlaniem około 12 ml do każdej szalki Petriego o średnicy 9 cm. Przechowuj wylane płytki w pozycji odwróconej i zaszczep za pomocą igły lub drutu, z płytką wciąż odwróconą, aby uniknąć rozproszenia zbłąkanych zarodników grzybów na powierzchni podłoża. Czas i temperatura inkubacji różnią się znacznie w zależności od uprawianego gatunku. Zasadniczo inkubuj przez 1-2 tygodnie w temperaturze 25 ° C. Większość gatunków Penicillium ma optymalną temperaturę wzrostu między 20 ° a 25 ° C, podczas gdy wiele gatunków Aspergillus rośnie najlepiej w około 30 ° C. Jednak różne grzyby rosną w szerokim zakresie temperatur; Aspergillus fumigatus dobrze rośnie w 50 ° C (Smith2), a Cladosporium herbarum będzie rosnąć na mięsie w -6 ° C 7,8.
Identyfikacja Candida albicans 1
Za pomocą igły do zaszczepiania (uprzednio podpalonej, schłodzonej i przetartej wacikiem) przetnij podłoże na płytce agarowej Czapek Dox Agar do podstawy płytki Petriego. Za pomocą tej samej igły podnieś podłoże wzdłuż całej strony cięcia, aby inokulum rozprzestrzeniło się między agarem a podstawą naczynia.
Inkubować zaszczepione płytki przez 24 godziny w 28 ° C.
Używając obiektywu o niskiej mocy, mikroskopowo zbadaj nieotwarte płytki pod kątem chlamydosporów przez podstawę każdej szalki. Ewentualnie usuń szczyty naczyń i zbadaj przez górną część podłoża.
Jeśli nie widać chlamydosporów, inkubuj przez kolejne 24 godziny i ponownie zbadaj.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki agarowe przechowywać w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Pożywka odwodniona: biały, sypki proszek
Przygotowane medium: żel w kolorze złamanej bieli
