Membrane Lactose Glucuronide Agar (MLGA), pożywka sypka

AGAR GLUKURONIDOWY MEMBRANOWY LAKTOZY (MLGA)

Kod: CM1031

Pożywka do różnicowania i liczenia Escherichia coli i innych bakterii z grupy coli za pomocą techniki pojedynczej filtracji membranowej.

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 40,0

Ekstrakt drożdżowy 6.0

Laktoza 30,0

Czerwony fenol 0.2

Laurylosiarczan sodu 1.0

Pirogronian sodu 0,5

Agar 10,0

X-Glukuronid (BCIG) 0.2

pH 7,4 ± 0,2 w 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia
Zawiesić 88 g w 1 litrze wody destylowanej. Dobrze wymieszaj i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić medium do 50 ° C i wlać do sterylnych szalek Petriego.

Opis
Testy na obecność bakterii coli i Escherichia coli są najważniejszymi rutynowymi badaniami mikrobiologicznymi przeprowadzanymi na wodzie pitnej. Zapewniają najbardziej wrażliwe środki do wykrywania zanieczyszczenia odchodami, oceny skuteczności uzdatniania i dezynfekcji wody oraz monitorowania jakości wody w dystrybucji1.

Organizmy izoluje się na filtrze membranowym i umieszcza na MLGA. Pożywka zawiera siarczan laurylowy do hamowania organizmów Gram-dodatnich. Identyfikacja Escherichia coli i bakterii z grupy coli jest ułatwiona dzięki dwóm reakcjom biochemicznym w pożywce: - Fermentacja laktozy jest wykrywana przez barwnikową czerwień fenolową, która daje żółte kolonie po wytworzeniu kwasu.

Chromogenny substrat 5-bromo-4-chloro-3-indolilo-ß-D-glukuronid (BCIG) jest trawiony przez enzym glukuronidazę i wytwarza niebieski chromofor, który gromadzi się w komórkach bakteryjnych.
Bakterie z grupy coli są pozytywne pod względem laktozy, więc kolonie będą żółte; Escherichia coli ma zarówno pozytywny wpływ na laktozę, jak i glukuronidazę, więc pojawią się jako zielone kolonie1

Technika
Pełna metodologia znajduje się w Agencji Ochrony Środowiska - Metody badania wód i materiałów towarzyszących - „Mikrobiologia wody pitnej 2002, część 4, Metoda B: Oznaczanie liczby bakterii z grupy coli i Escherichia coli za pomocą techniki filtracji z pojedynczą membraną”.

Przefiltrować próbkę wody do analizy przez filtr membranowy (średnica 47 mm, średnica porów na bazie celulozy 0,45 µm). Objętość i rozcieńczenie przefiltrowanej wody należy wybrać, aby podać liczbę kolonii, które należy policzyć na membranie jako 20–80. W przypadku wód uzdatnionych należy przefiltrować 100 ml. W przypadku wód zanieczyszczonych należy użyć mniejszej objętości lub rozcieńczonej próbki.

Umieść filtr membranowy na płytce MLGA, upewniając się, że pod membraną nie uwięziono żadnych pęcherzyków powietrza. Inkubować płytki w 30 ° C przez 4 godziny, a następnie w 37 ° C przez 14 godzin. W celu wczesnego wskazania wyników płytki można badać pod kątem kolonii po 12 godzinach, ale należy je ponownie inkubować przez pełne 18 godzin.

Policz wszystkie żółte i zielone kolonie. Żółte kolonie są przypuszczalnymi bakteriami coli z gatunku Escherichia coli, a zielone kolonie to Escherichia coli. Połączoną liczbę można uznać za liczbę bakterii z grupy coli. Wyniki wyrażono w jednostkach tworzących kolonię na objętość próbki.

Specyficzność reakcji w pożywce oznacza, że ​​prawdopodobieństwo zielonych kolonii na MLGA jako Escherichia coli jest bardzo wysokie. Po odpowiednim potwierdzeniu wyników w laboratorium potwierdzenie zielonych kolonii może nie być konieczne. Jeśli wymagane są testy potwierdzające, zapoznaj się z dokumentem Agencji Ochrony Środowiska w celu uzyskania pełnej metodologii1

Warunki przechowywania i okres ważności
Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przechowywać przygotowane podłoże może być przechowywane do 1 tygodnia w 2-8 ° C.

Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: jasny czerwony żel