AGAR ENTEROBACTER SAKAZAKII
KOD: CM1134
Pożywka chromogenna do wykrywania i oznaczania liczby Cronobacter (wcześniej E. sakazakii) w mleku i próbkach mleka, jak opisano w ISO TS / 22964: 20061. Do stosowania w połączeniu z pożywką mLST / wankomycyną (CM1133 i SR0247E)
Typowa formuła * gm / litr
Trzustkowe trawienie kazeiny 7.0
Ekstrakt drożdżowy 3.0
Chlorek sodu 5.0
Deoksycholan sodu 0,6
Α-D-glukopiranozyd 5-bromo-4-chloro-3-indolilo 0,15
Krystaliczny fiolet 0,002
Agar 12,0
pH 7,0 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Trzustkowe trawienie kazeiny = trzustkowy pepton kazeiny
Deoksycholan sodu = dezoksycholan sodu
Sposób użycia
Zawiesić 27,75 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić do około 50 ° C. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Cronobacter (dawniej Enterobacter sakazakii) to Gram-ujemni członkowie rodziny Enterobacteriaceae w kształcie pałeczek, którzy byli zamieszani w wybuchy choroby u wcześniaków (noworodków), powodując posocznicę, zapalenie opon mózgowych i martwicze zapalenie jelit. Uszkodzenie neurologiczne może być trwałe, a śmiertelność szacuje się na 40–80% 1.
Cronobacter spp. zostały wyizolowane na niskim poziomie ze sproszkowanych preparatów dla niemowląt, a wysoka tolerancja organizmów na suszenie zapewnia przewagę konkurencyjną w suchym otoczeniu fabryk mleka w proszku, zwiększając ryzyko zanieczyszczenia produktu2.
W odpowiedzi na obawy dotyczące tego patogenu, ISO i IDF wydały wspólnie specyfikację techniczną dotyczącą wykrywania Cronobacter w mleku i produktach mlecznych jako ISO / TS22964: 20063. Zaleca się wstępne wzbogacenie w BPW, selektywne wzbogacenie w bulionie mLST / wankomycyny i posiew na agarze do izolacji Enterobacter sakazakii. Pozytywne kolonie są potwierdzane na podstawie wykorzystania cukru, aktywności dekarboksylazy, a także żółtej pigmentacji.
W przeciwieństwie do większości innych członków Enterobacteriaceae, Cronobacter posiada enzym α-glukozydazę, który jest stosowany jako funkcja diagnostyczna w podłożu chromogennym. Agar do izolacji Enterobacter sakazakii zawiera substrat dla tego enzymu, 5-bromo-4-chloro-3-indolilo α-D-glukopiranozyd (X-α-gluk). Cronobacter hydrolizuje ten bezbarwny chromogen, tworząc charakterystyczne niebiesko-zielone kolonie do identyfikacji na płytce. Deoksycholan sodu i fiolet krystaliczny są również włączone do pożywki, aby zahamować wzrost organizmów Gram-dodatnich.
Unia Europejska bezpośrednio określiła limity poziomów Cronobacter w suszonych preparatach dla niemowląt, suszonych dietetycznych produktach specjalnego przeznaczenia medycznego oraz żywności przeznaczonej dla niemowląt w wieku poniżej sześciu miesięcy, w rozporządzeniu Komisji nr 2073/20054. Zgodnie z tym rozporządzeniem w odniesieniu do produktów wprowadzanych do obrotu w okresie przydatności do spożycia należy przetestować 30 próbek 10 g, a producent żywności musi wykazać brak Cronobacter w każdej z tych próbek, stosując ISO / TS 22964: 20063.
Technika
Szczegółowe instrukcje znajdują się w odpowiedniej standardowej metodzie. Poniższa metoda jest streszczeniem ISO / TS 22964: 20063
Przygotuj próbkę testową zgodnie z ISO 68875, ISO 82616 lub odpowiednią normą
Homogenizować x g próbki w 9 razy x ml buforowanej wody peptonowej ISO (CM1049)
Inkubować próbki w 37 ° C ± 1 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny
Przenieść 0,1 ml wzbogacenia do 10 ml bulionu mlST / wankomycyny (CM1133 i SR0247)
Inkubować w 44 ° C ± 0,5 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Za pomocą 10 µl pętli nanieść na powierzchnię płytki agarowej z izolacją Enterobacter sakazakii (CM1134), odwrócić i inkubować płytki w temperaturze 44 ° C ± 1 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Wybierz 1-5 niebiesko-zielone kolonie do potwierdzenia
Rozłóż na płytkach agar tryptonowy Soya (CM0131), inkubuj w 37 ° C ± 1 ° C przez 46 ± 2 godziny i sprawdź, czy nie ma żółtego zabarwienia
Wykonaj wymagane testy biochemiczne
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże najlepiej stosować świeżo przygotowane, ale może być odpowiednie do dłuższego przechowywania po wewnętrznej weryfikacji.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: żel o fioletowym kolorze
