Violet Red Bile Glucose Agar, pożywka sypka

AGAR GLUKOZOWY FIOLETOWY CZERWONY ŻÓŁTY

Kod: CM0485

Selektywne podłoże zawierające glukozę do wykrywania i oznaczania liczby Enterobacteriaceae w produktach spożywczych

Typowa formuła * gm / litr

Ekstrakt drożdżowy 3.0

Pepton 7.0

Chlorek sodu 5.0

Sole żółciowe nr 3 1.5

Glukoza 10,0

Neutralny czerwony 0,03

Krystaliczny fiolet 0,002

Agar 12,0

pH 7,4 ± 0,2 w 25 ° C

 * Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia 
Zawiesić 38,5 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia. Kontynuuj gotowanie przez 2 minuty lub przez minimalny czas niezbędny do całkowitego rozpuszczenia i upewnij się, że nie pozostały żadne plamki nietopionego agaru. Żadna dalsza sterylizacja nie jest konieczna ani pożądana. Dobrze wymieszaj i dozuj do rurek lub naczyń.

Opis
Wyniki badań, które można zastosować do wody w celu wykrycia organizmów coli-aerogenes jako możliwych wskaźników zanieczyszczenia kałem, mają znacznie mniejsze znaczenie w przypadku zastosowania do surowej żywności. Podczas badania środków spożywczych zaleca się wykrycie bardziej określonej grupy organizmów, Enterobacteriaceae, które fermentują glukozę w celu wytworzenia kwasu i / lub gazu1,2. Oprócz bakterii z grupy coli ta grupa obejmuje salmonellę i shigellę, które nie fermentują laktozy, i enterotoksyczne Escherichia coli. Zawiera także organizmy, takie jak Klebsiella i Citrobacter, które są bardziej odporne na ciepło niż bakterie z grupy coli, a zatem są lepszymi wskaźnikami niepowodzenia procesów wykorzystujących minimalne ciepło.

Trudności w mierzeniu całkowitej zawartości Enterobacteriaceae w produktach spożywczych zostały zbadane przez Mossel i wsp. 3, którzy wykazali, że dodanie glukozy do istniejącej pożywki w celu wykrycia bakterii z grupy coli poprawia wydajność. Dodali 10 g na litr glukozy do agarowego laktozy z fioletowo-krystalicznym, neutralnym, czerwonym i żółciowym (Violet Red Bile Agar CM0107) i nazwali zmodyfikowany preparat MacConkey Glukose Agar.

Dalsza praca Mossel i wsp. 4,5 wykazała, że ​​laktozę można pominąć, uzyskując w ten sposób preparat fioletowo-żółciowo-agarowej glukozy. Dalsze włączanie laktozy nie zapewniłoby wyników badań prowadzących do dokładniejszej identyfikacji. Wyłączenie laktozy sprawia, że ​​podłoże jest bardziej ekonomiczne, ponieważ wymagana jest mniejsza waga na litr.

Pożywki zawierające sole żółciowe mają wewnętrzną toksyczność dla Enterobacteriaceae, nawet dla komórek, które nie były poddane stresowi6,7,8,9,10,11.

Zaobserwowano znaczne różnice między sześcioma komercyjnymi preparatami fioletowo-czerwonej żółci Agar4,5 pod względem produktywności dla Enterobacteriaceae12 i intensywności ich metabolizmu. W połączeniu z Oxoidem zbadano składniki podłoża, a Mossel opracował specyfikację w następujący sposób:

Zatwierdzone pożywki muszą być czyste i dawać kolonie o zadowalającym rozmiarze. Muszą podać powtarzalne liczby typowych kolonii Enterobacteriaceae.
Po prowokacji z powodu toksyczności wewnętrznej beztlenowym testem metabolicznym 13 z wykorzystaniem szczepu Yersinia enterocolitica (Serotyp 03) jako czułego wskaźnika, pożywka musi promować odpowiedni wzrost, tworzenie kwasu i, w razie potrzeby, odpowiednie tworzenie gazu.
Pożywki muszą spełniać wskaźnik potwierdzenia typowych kolonii, tj. Liczbę kolonii potwierdzonych jako Enterobacteriaceae podzieloną przez liczbę testowanych kolonii.
Agar z fioletowo-czerwoną żółcią i glukozą został opracowany w celu spełnienia wszystkich tych kryteriów.

VRBGA CM0485 jest testowany zgodnie z ISO11133: 201415

Technika
Przygotuj serię rozcieńczeń próbek, aby uwzględnić co najmniej jedno, które da 100-200 kolonii z 1 ml podwielokrotności. Przenieść 1 ml podwielokrotności każdego rozcieńczenia na 9 cm płytki Petriego, używając 2 płytek dla każdego rozcieńczenia. Dodaj 15 ml pożywki, ochłodź do 47 ° C. Delikatnie obracaj płytki 3 razy w prawo i 3 razy w lewo. Po zestaleniu się pożywki z 10 ml tego samego podłoża i pozostawić do zestalenia. Odwrócić płytki i inkubować w> 42 ° C przez 18 godzin, 32 ° C przez 24-48 godzin lub 4 ° C przez 10 dni, w zależności od grup Enterobacteriaceae, które mają zostać odzyskane.

Nakładka agarowa zapewnia warunki beztlenowe, które hamują wzrost niefermentujących bakterii Gram-ujemnych. Zachęca również do fermentacji glukozy, co sprzyja tworzeniu wyraźnie widocznych fioletowych kolonii, otoczonych purpurowo-różową otoczką wytrącania żółci.

Charakterystyczny wygląd kolonii
Okrągły, purpurowo-różowy, o średnicy 1-2 mm otoczony fioletowym aureolą.
Chociaż rozmiar kolonii wynosi zwykle 1-2 mm, na wielkość może wpływać wiele czynników i należy policzyć wszystkie kolonie fioletowo-różowe. Potwierdzenia tożsamości tych kolonii należy dokonać w dalszych testach.

Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże przechowuj w temperaturze 2–8 ° C i używaj możliwie świeżo.

Wygląd
Medium odwodnione: proszek w kolorze słomkowo-różowym
Przygotowane medium: żel o fioletowym kolorze