AGAR IZOLACJI CHROMOGENICZNEJ KRONOBAKTERU (CCI)
Nowe podłoże chromogenne do wykrywania Cronobacter (wcześniej E. sakazakii) z próbek żywności i próbek środowiskowych. Do stosowania w połączeniu z bulionem przesiewowym Cronobacter (CM1121)
KOD: CM1122
Typowa formuła * gm / litr
Ekstrakt drożdżowy 3.0
Chlorek sodu 5.0
Tryptone 7.0
Tiosiarczan sodu 1.0
Dezoksycholan sodu 0,25
Cytrynian żelazowo-amonowy 1.0
Α-D-glukopiranozyd 5-bromo-4-chloro-3-indolilo 0,15
Agar 13.2
pH 7,3 ± 0,2 @ 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 30,6 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić do około 50 ° C. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.
Opis
Cronobacter (dawniej Enterobacter sakazakii) to Gram-ujemni członkowie rodziny Enterobacteriaceae w kształcie pałeczek, którzy byli zamieszani w wybuchy choroby u wcześniaków (noworodków), powodując posocznicę, zapalenie opon mózgowych i martwicze zapalenie jelit. Uszkodzenie neurologiczne może być trwałe, a śmiertelność szacuje się na 40–80% 1.
Cronobacter spp. zostały wyizolowane na niskim poziomie ze sproszkowanych preparatów dla niemowląt, a wysoka tolerancja organizmów na suszenie zapewnia przewagę konkurencyjną w suchym otoczeniu fabryk mleka w proszku, zwiększając ryzyko zanieczyszczenia produktu2.
Ciągły rozwój nowej horyzontalnej standardowej metody CEN-ISO do wykrywania Cronobacter spp przez grupę ISO / TC 34, SC 9Ad hoc dla E. sakazakii, dotyczy takich kwestii, jak zakres metody, wiarygodność kryteriów identyfikacji i ulepszenia do mediów 1. W oczekiwaniu na te przyszłe potrzeby Oxoid wprowadził nowy bulion przesiewowy Cronobacter (CM1121) i agar chromogenny Cronobacter Isolation (CM1122).
Agar Chromogenic Cronobacter Isolation (CCI) to optymalizacja oryginalnego agaru Brilliance ™ Enterobacter Sakazakii (DFI), opracowanego przez Iversen i in. w 2004 r. Zwiększono stężenie chromogenu X-α-glukozydu, aby poprawić niebiesko-zielone zabarwienie szczepów Cronobacter o słabej aktywności glukozydazy. Tiosiarczan sodu i cytrynian żelaza amonowego (III) są włączone w celu rozróżnienia Enterobacteriaceae wytwarzających siarkowodór, które są zabarwione na szaro / brązowo, i dodawany jest dezoksycholan sodu w celu zahamowania wzrostu konkurentów Gram-dodatnich.
Technika
Przygotuj próbkę testową zgodnie z ISO 68874, ISO 82615 lub odpowiednią normą
Homogenizować x g próbki w 9 razy x ml buforowanej wody peptonowej ISO (CM1049)
Inkubować próbki w 37 ° C ± 1 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny
Przenieść 0,1 ml wzbogacenia do 10 ml CSB i inkubować w 41,5 ° C ± 1 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Jeśli bulion jest fioletowy, wynik jest negatywny i nie jest wymagana dalsza praca. Jeśli bulion jest żółty, przejdź do kroku 6.
Za pomocą 10 µl pętli nanieść na powierzchnię płytki agarowej CCI
Odwrócić i inkubować płytki w temperaturze 44 ° C ± 1 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Wybierz 1-5 niebieskich / zielonych kolonii do potwierdzenia
Rozłóż na płytkach z agarem tryptonowym z soi i inkubuj w 37 ° C ± 1 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny
Wykonaj wymagane testy biochemiczne
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie
Przygotowane podłoże przechowuj w temperaturze 2–8 ° C
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: żel w kolorze słomy
