Kanamycin Aesculin Azide Agar Base, pożywka sypka

PODSTAWA AGARU KANAMYCIN AESCULIN AZIDE

Kod: CM0591

selektywne podłoże w przypadku stosowania z suplementem kanamycyny (SR0092) do izolacji enterokoków w produktach spożywczych

Typowa formuła * gm / litr

Tryptone 18,8

Ekstrakt drożdżowy 5.0

Chlorek sodu 5.0

Cytrynianu sodowego 1.0

Eskulina 1.0

Cytrynian żelazowo-amonowy 0,5

Azydku sodowego 0,15

Skrobia 0,6

Mieszanka dla paciorkowców 0,6

 Agar 10,0

Końcowe pH 7,0 ± 0,2 przy 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia 
Zawiesić 21,3 g w 500 ml wody destylowanej. Dodaj jedną fiolkę suplementu Kanamycin (SR0092), przygotowaną zgodnie z zaleceniami. Doprowadzić do wrzenia. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

SUPLEMENT KANAMYCYNY

Kod: SR0092

Zawartość fiolki (każda fiolka wystarcza na 500 ml pożywki)
na fiolkę
na litr
Siarczan kanamycyny

10,0 mg
20,0 mg

Sposób użycia 
Dodaj 2 ml sterylnej wody destylowanej do jednej fiolki i delikatnie wymieszaj, aby całkowicie się rozpuścił. Dodaj zawartość do 500 ml bazy agarowej Kanamycin Aesculin Azide.

Opis
Agar Aesculin Azydek Kanamycyny został zaprojektowany przez Mossel i wsp. 1,2 w celu wykrywania enterokoków w produktach spożywczych. Okrągłe, białe lub szare kolonie o średnicy około 2 mm, otoczone czarnymi strefami o średnicy co najmniej 1 cm są uważane za enterokoki (przypuszczalne). Inkubacja odbywa się tlenowo w temperaturze 35 ° C lub 42 ° C ± 0,3 ° C przez 18–24 godzin. Wyższa temperatura inkubacji zwiększa selektywność pożywki. Pożywkę tę zastosowali Mossel i in. 3 w technice Dip Slide do bakteriologicznego monitorowania żywności. Agar kanamycyny Aesculin Azydek z powodzeniem stosowano do izolacji enterokoków opornych na glikopeptydy z próbek klinicznych i żywności4,5.

Baza agarowa kanamycyny aesculin azydkowej zastąpiła agar kanamycyny aesculin azydkowej aide, aby przestrzegać zasad Oxoid BHP, zgodnie z którymi antybiotyki nie powinny być obecne w sproszkowanych pożywkach hodowlanych, gdzie mogą być wdychane lub zanieczyszczać powierzchnie. Siarczan kanamycyny dodaje się osobno do 500 ml zrekonstytuowanego agaru z liofilizowanych fiolek Suplement siarczanu kanamycyny (SR0092) zawierający dokładnie wymaganą ilość antybiotyku.

Pożywka zawiera selektywne składniki hamujące siarczan kanamycyny i azydek sodu. Zawiera także system wskaźników do wykrywania wzrostu paciorkowców hydrolizujących eskulinę. Organizmy te wytwarzają czarne strefy wokół kolonii w wyniku tworzenia związków fenolowych czarnego żelaza pochodzących z produktów hydrolizy eskuliny i żelaza żelaznego.

Technika
Metoda posiewu dla próbek: rozprowadź 0,1 ml rozcieńczeń próbek na całej wstępnie wysuszonej płytce o średnicy 9 cm.
Poniższa procedura testowania środków spożywczych została zaadaptowana z Mossel, Harrewijn i Elzebroek6.

Przygotuj probówki ze sterylizowaną wodą tryptonową (CM0087) w 9 ml objętościach. Schłodzić do 0-5 ° C, przechowując w lodówce przez 18 godzin przed użyciem.
Dodaj 1 g lub 1 ml dokładnie wymieszanej próbki żywności do probówki zawierającej 9 ml wstępnie schłodzonego rozcieńczalnika (rozcieńczenie 10-1). Wstrząśnij dobrze przez 30 sekund. Próbkę 1 ml zawartości, w ciągu 30 sekund po zmieszaniu, umieścić w świeżej tubce z rozcieńczalnikiem. Kontynuuj proces, używając świeżych sterylnych pipet, aż do osiągnięcia rozcieńczenia, które wytworzy 100 kolonii na 1 ml. Roztwory dziesiętne przechowuj w lodówce i zbadaj w ciągu 3 godzin od ich przygotowania.
Rozprowadzić na płytkach agar kanamycyny aesculin azydkowej i inkubować przez 16–24 godzin w temperaturze 35 ° C ± 1 ° C. Rozważ pozytywny wynik dla enterokoków, gdy hodowane są kolonie otoczone czarnymi aureolami.
Można przeprowadzić testy potwierdzające, np. test katalazy, wykorzystanie glukozy, wzrost w 45 ° C ± 1 ° C, tworzenie łańcuchów Gram-dodatnich ziarniaków.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoża przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.

Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane podłoże: żel w kolorze słomy / zielony z niebieskim odcieniem