BRILLIANT GREEN AGAR
Kod: CM0263
Selektywne podłoże do izolacji salmonelli, inne niż Salmonella typhi.
Typowa formuła * gm / litr
Pepton proteinowy 10,0
Ekstrakt drożdżowy 3.0
Laktoza 10,0
Sacharoza 10,0
Chlorek sodu 5.0
Czerwony fenol 0,08
Brilliant Green 0,0125
Agar 12,0
pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 50 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.
Opis
Genialny zielony agar został po raz pierwszy opisany przez Kristensen i wsp.1 jako selektywne podłoże izolacyjne dla gatunków Salmonella. Kauffmann2 zmodyfikował ich formułę, aby uzyskać wysoce selektywne podłoże do posiewu do izolacji i identyfikacji salmonelli z kału i innych materiałów patologicznych oraz z żywności i mleka produkty. Pożywka ta nie została zaprojektowana do izolacji Salmonella typhi lub Shigella i tam, gdzie można się z nią spotkać, należy użyć Brilliant Green Agar równolegle z innymi selektywnymi podłożami posiewającymi, takimi jak agar desoksycholanowo-cytrynowy (Hynes) CM0227, agar enterotyczny Hektoen CM0419, X.L.D. Agar CM0469. Agar z siarczynem bizmutu (zmodyfikowany) CM0201 jest szczególnie zalecany w przypadku Salmonella typhi.
Zastosowanie wzbogaconych / selektywnych bulionów przed subkulturą na brylantowym zielonym agarze zwiększy prawdopodobieństwo izolacji salmonelli. Tetrathionate Bulion Base CM0029, Tetrathionate Broth USA CM0671, Selenite Broth Base CM0395 i Muller-Kauffmann Tetrathionate Broth Base CM0343 mogą być stosowane w połączeniu z Brilliant Green Agar.
Brilliant Green Agar odpowiada pożywce zalecanej przez APHA3,4.
Dodatek sulfonamidów do Brilliant Green Agar pomaga poprawić izolację salmonelli5. Do jednego litra Brilliant Green Agar dodaj 1,0 g sulfapirydyny lub 0,8 g sulfadiazyny i wysterylizuj w zwykły sposób.
Technika
Badanie kału lub podobnego materiału w przypadku salmonelli:
Mocno zaszczepić płytkę Brilliant Green Agar. Jednocześnie zaszczepić inne pożywki i probówki bulionem selenitowym i bulionem tetrationowym.
Inkubuj płytkę Brilliant Green Agar przez 18-24 godzin w temperaturze 35 ° C.
Zbadaj płytki i zidentyfikuj podejrzane kolonie za pomocą testów różnicowych dla metod serologicznych.
Jeśli nie zaobserwuje się fermentorów innych niż laktoza na pierwotnych hodowlach płytkowych, zaszczepić Brilliant Green Agar i inne pożywki hodowlami wzbogacającymi - następnie postępować jak w punkcie 3.
Badanie żywności
Wstępnie wzbogacić cztery porcje 25 g żywności w 75 ml buforowanej wody peptonowej CM0509 i inkubować w temperaturze 35 ° C przez 4-6 godzin.
Dodaj do każdej próbki 75 ml bulionu Selenite Cystine o podwójnej mocy CM0699 i inkubuj w temperaturze 43 ° C przez 24 godziny.
Subkultura w płytkach agresywnego zielonego agaru i agarowego siarczynu bizmutu (zmodyfikowanego) CM0201.
Inkubować płytki w temperaturze 35 ° C i zbadać genialny zielony agar po 24 godzinach i agar siarczynowy bizmutu po 48 godzinach.
Poszukaj kolonii z cechami salmonelli i potwierdź ich tożsamość za pomocą testów biochemicznych i serologicznych.
Charakterystyka kolonialna
Organizmy nie fermentujące laktozy / sacharozy
Czerwono-różowo-białe nieprzezroczyste kolonie otoczone jaskrawymi czerwonymi strefami w agarze - najprawdopodobniej salmonellą (ale nie Salmonellą typhi).
Gatunki Proteus i Pseudomonas
Mogą rosnąć jako małe czerwone kolonie.
Organizmy fermentujące laktozę / sacharozę (normalnie hamowane)
Kolonie o barwie od żółtej do zielono-żółtej otoczone intensywnymi żółto-zielonymi strefami w agarze - grupa Escherichia coli lub grupa Klebsiella / Enterobacter.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki z medium przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Pożywka odwodniona: proszek w kolorze słomkowo-zielonym
Przygotowane podłoże: żel w kolorze zielono-brązowym
