Sorbitol MacConkey Agar, pożywka sypka

SORBITOL MacCONKEY AGAR
Kod: CM0813

selektywne i różnicowe podłoże do wykrywania Escherichia coli O157

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 20,0

Sorbitol 10,0

Sole żółciowe nr 3 1.5

Chlorek sodu 5.0

Neutralny czerwony 0,03

Krystaliczny fiolet 0,001

Agar 15,0

pH 7,1 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności


Sposób użycia
Zawiesić 51,5 g w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Pozostawić do ostygnięcia do 50 ° C. Wlać do sterylnych szalek Petriego.

W razie potrzeby rozpuścić jedną fiolkę suplementu C-T na 500 ml podłoża, zgodnie z instrukcjami w ulotce produktu. Aseptycznie dodaj to do schłodzonego podłoża przed przelaniem do sterylnych szalek Petriego

Opis
Escherichia coli O157 jest rozpoznawana jako przyczyna krwotocznego zapalenia jelita grubego, choroby charakteryzującej się krwawą biegunką i silnym bólem brzucha oraz zespołem hemolityczno-mocznicowym (HUS) 1, 2, 3, 4, 5 i jako taka jest znaczącym ludzkim patogenem.

Agar Sorbitol MacConkey jest zalecany do izolacji patogennych E. coli O157. Preparat oparty na opisanym przez Rappaporta i Heniga 6 jest identyczny z agarem MacConkey nr 3, z tym wyjątkiem, że laktozę zastąpiono sorbitolem. E. coli O157 nie fermentuje sorbitolu, a zatem wytwarza bezbarwne kolonie. Natomiast większość szczepów E. coli fermentuje sorbitol i tworzy różowe kolonie. Skuteczność Sorbitolu MacConkey Agar została potwierdzona przez Marcha i Ratnam7. Pracownicy ci zgłosili czułość 100% i swoistość 85% i zalecili podłoże jako prosty, niedrogi, szybki i niezawodny sposób badania przesiewowego w kierunku E. coli O157.

Chapman i współpracownicy8 dodali cefiksym i telluryn potasu do Sorbitol MacConkey Agar, aby poprawić selektywność podłoża. Poziom tellurynu potasu wybiera serogrupę O157 spośród innych serogrup E. coli i hamuje gatunki Providencia i Aeromonas. Cefiksym hamuje Proteus spp.

Zastosowanie cefiksymu i tellurytu w agarze Sorbitol MacConkey do izolacji E. coli O157: H7 opisano w FDA Bacteriological Analytical Manual 9.

Technika
1. Przygotuj agar zgodnie ze wskazówkami i wlej do płytek. W razie potrzeby osusz powierzchnię agaru.
2. Zaszczepić płytki zawiesiną badanej substancji (żywność, kał itp.) W celu wytworzenia oddzielnych kolonii.
3. Inkubuj w 35 ° C przez 24 godziny. Doyle i Schoeni 10 podali, że 35-37 ° C jest optymalną temperaturą dla wzrostu Escherichia coli O157. W 44–45,5 ° C wzrost jest słaby, nawet po 48 godzinach inkubacji.

Należy unikać opóźnień w czytaniu płytek powyżej 24 godzin, ponieważ intensywność kolorów kolonii fermentujących sorbitol zanika, zmniejszając kontrast z koloniami niefermentującymi. Inne organizmy Gram-ujemne, w tym gatunki Pseudomonas, Proteus i Klebsiella, mogą rosnąć na agarze Sorbitol MacConkey, ale ogólnie można je odróżnić wyglądem ich kolonii.

Dostępny jest odczynnik diagnostyczny Test lateksowy Escherichia coli O157 (DR0620), dzięki czemu można podejrzeć natychmiastowe testy potwierdzające z podejrzanych kolonii.

Warunki przechowywania i okres ważności
Odwodniony agar Sorbitol MaConkey należy przechowywać szczelnie zamknięty w oryginalnym pojemniku w temperaturze 10–30ºC.

Suplement cefiksym-tellurynowy (SR0172) należy przechowywać w ciemności w temperaturach poniżej 0 ° C.

Płytki Oxoid Sorbitol MacConkey i Cefixime Tellurite Sorbitol MacConkey należy przechowywać w oryginalnym opakowaniu, w temperaturze podanej na opakowaniu lub w specyfikacji produktu i chronić przed bezpośrednim światłem. W przypadku przechowywania zgodnie z zaleceniami nieotwarty produkt pozostanie stabilny do daty ważności na etykiecie.

Lokalnie przygotowane nośniki mogą być przechowywane do 2 tygodni, jeśli są wykonane z CM0813 i SR0172 zgodnie z instrukcjami producenta i przechowywane w temperaturze 2-8ºC, z dala od bezpośredniego światła słonecznego i chronione przed zniszczeniem. Dłuższy okres trwałości może być osiągalny, ale należy go zweryfikować w odpowiednich lokalnych warunkach produkcji i przechowywania.

Wygląd
Medium odwodnione: słomy / różowy, sypki proszek
Przygotowane medium: Ciemnoczerwony żel