BRILLIANCE E. COLI / COLIFORM SELEKTYWNY AGAR
Kod: CM1046
Brilliance ™ E. coli / coliform Selective Agar (wcześniej Chromogenny E. coli / coliform Selective Agar) służy do wykrywania i liczenia Escherichia coli i innych bakterii coli z próbek żywności i wody.
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 8.0
Wodorofosforan sodu 2.2
Chlorek sodu 5.0
Dwuwodorofosforan potasu 1.8
Laurylosiarczan sodu 0,1
Mieszanka chromogenna 0,35
Aga 10,6
pH 6,7 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 28,1 g Brilliance E. coli / coliform Selective Agar w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzić medium delikatnie do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściło. Wlej pożywkę do sterylnych szalek Petriego lub utrzymuj stopiony w temperaturze 45ºC, aby uzyskać technikę wlewania płytek.
Opis
Odzyskiwanie i oznaczanie liczby bakterii Escherichia coli i coli jest ważnym wskaźnikiem higieny środowiska i higieny żywności. Wykrywanie aktywności ß-glukuronidazy jest szeroko stosowane do różnicowania bakterii Escherichia coli, ponieważ enzym kodowany przez gen uidA jest obecny w Escherichia coli, ale nie u innych członków grupy coli. Ponieważ bakterie z grupy coli wykazują laktozę, aktywność ß-galaktozydazy, kodowana przez gen lacZ, jest następnie wykorzystywana do odróżnienia tej grupy od innych organizmów zdolnych do wzrostu na pożywce selektywnej. Powoduje to purpurowe E. coli, ponieważ są one zdolne do cięcia obu chromogenów, a inne bakterie z grupy coli dają różowe kolonie, ponieważ przecinają tylko chromogen galaktozydowy.
Brilliance E. coli / coliform Selective Agar zawiera dwa czynniki chromogenne:
Rose-Gal: wykrywa aktywność ß-galaktozydazy
X-Glu: wykrywa aktywność ß-glukuronidazy.
Pożywka zawiera również laurylosiarczan sodu, który działa jako środek selektywny, hamując wzrost organizmów Gram-dodatnich.
Większość organizmów z grupy coli jest w stanie fermentować laktozę, więc rozdzieli różowy chromogen Rose-Gal, tworząc różowe kolonie. Szczepy Escherichia coli można odróżnić od innych bakterii z grupy coli, ponieważ posiadają one także enzym ß-glukuronidazę (wykazano, że jest wysoce swoisty dla Escherichia coli). Enzym ten jest celem chromogenu X-Glu. Zdolność gatunków Escherichia coli do rozszczepiania obu chromogenów oznacza, że typowe kolonie będą fioletowe (patrz Tabela 1).
Technika
Selektywny agar Brilliance E. coli / coli można stosować do wykrywania i liczenia Escherichia coli i bakterii coli w próbkach żywności i wody.
Przygotuj próbki żywności, rozcieńczając 1: 5 lub 1:10 (odpowiednio) 0,1% (m / v) sterylną wodą peptonową (CM0009) i homogenizuj w Stomacher lub laboratoryjnym blenderze. Silnie zanieczyszczone próbki wody należy najpierw rozcieńczyć roztworem Ringera (BR0052) lub rozcieńczalnikiem do maksymalnego odzysku (CM0733), aby liczba kolonii do zliczenia była czytelna, np. 20-100 kolonii. Wodę pitną należy zatężyć przez odwirowanie lub za pomocą membrany filtracyjnej.
Można zastosować następujące techniki:
1. Rozłóż talerz
Wysuszyć powierzchnię przygotowanych płytek. Odmierzyć pipetą 0,1 ml przygotowanej próbki na płytkę i rozprowadzić na powierzchni za pomocą sterylnego rozpylacza. Inkubować płytki przez 24 godziny w 37ºC.
2. Metoda nalewania
Odmierzyć pipetą 1 ml przygotowanej próbki do pustej szalki Petriego. Dodaj 15-20 ml pożywki, schłodzonej do 45ºC. Delikatnie wiruj płytki, aby dokładnie wymieszać i pozostawić do zestalenia. Inkubować przez 24 godziny w 37 ° C.
3. Metoda filtra membranowego
Wysuszyć powierzchnię przygotowanych płytek. Przefiltruj odpowiednią objętość próbki przez membranę. Umieść membranę na powierzchni płytki agarowej i unikaj uwięzienia pęcherzyków powietrza pod membraną. Inkubować przez 24 godziny w 37 ° C.
Dla wszystkich metod policz liczbę różowych i fioletowych kolonii. Pomnóż liczbę kolonii przez współczynnik rozcieńczenia i wyraż wynik jako liczbę bakterii z grupy coli i Escherichia coli na gram jedzenia lub objętość wody.
Warunki przechowywania i okres ważności
Odwodnione podłoże: przechowywać szczelnie zamknięte w oryginalnym pojemniku w temperaturze 10-30 ° C
Przygotowane podłoże będzie stabilne przez okres do 2 tygodni, jeśli będzie przechowywane w temperaturze 2-8ºC
Wygląd
Pożywka odwodniona; jasny, sypki proszek
Przygotowane medium; jasny przezroczysty żel w kolorze słomy
