AGE PSEUDOMONAS CETRIMIDE (USP, EP)
Kod: CM0579
Pseudomonas Cetrimide Agar służy do selektywnej izolacji i identyfikacji Pseudomonas aeruginosa.
Typowa formuła * gm / litr
Pepton żelatynowy 20,0
Chlorek magnezu 1.4
Siarczan potasu 10,0
Cetrimid 0,3
Agar 13,6
Końcowe pH 7,2 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 45,3 g agaru Pseudomonas Cetrimide w 1 litrze wody destylowanej. Dodaj 10 ml glicerolu i zagotuj, aby całkowicie się rozpuścił. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić pożywkę do około 50 ° C i wlać do jałowych szalek Petriego.
Opis
Modyfikacja pożywki opisana przez Browna i Lowbury3 do selektywnej izolacji i różnicowania Pseudomonas aeruginosa z szeregu próbek.
Cetrimid jest czwartorzędowym związkiem amonowym o działaniu bakteriobójczym przeciwko szerokiej gamie organizmów Gram-dodatnich i niektórych organizmów Gram-ujemnych.
Pseudomonas aeruginosa produkuje wiele rozpuszczalnych w wodzie chelatorów żelaza, w tym żółto-zieloną lub żółto-brązową fluorescencyjną pyowerdynę. Kiedy pirowerdyna łączy się z niebieską rozpuszczalną w wodzie pirocyjaniną, powstaje jasnozielony kolor charakterystyczny dla Pseudomonas aeruginosa. Dodatek chlorku magnezu i siarczanu potasu zwiększa produkcję tych chelatorów.
Agar cetrimidowy jest zalecany w Farmakopei Stanów Zjednoczonych XXVI1 i Farmakopei Europejskiej IV2 do stosowania w testach limitów mikrobiologicznych. Preparat znajduje się również w A.O.A.C. wytyczne4 dotyczące izolacji Pseudomonas aeruginosa od kosmetyków oraz w A.O.A.C. metoda5 do testowania środków dezynfekujących na twardych powierzchniach.
Testy limitów mikrobiologicznych
Farmakopea USA i UE stwierdza, że artykuły farmaceutyczne, od surowców po produkty gotowe, muszą być monitorowane pod kątem całkowitej liczby obecnych żywych organizmów tlenowych (Total Aerobic Microbial Count), a także że muszą być całkowicie wolne od następujących organizmów; Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, gatunki Salmonella i Escherichia coli.
W celu zbadania materiałów na nieobecność określonych organizmów próbkę najpierw rozpuszcza się lub zawiesza w pożywce do odzyskiwania, takiej jak bulion sojowy Tryptone (CM0129, CM0876 lub CM1065). Próbkę należy inkubować w tym podłożu w temperaturze 35–37 ° C na tyle długo, aby umożliwić ożywienie organizmów z uszkodzeniem podśmiertelnym, ale nie rozmnażanie się (zwykle 2–5 godzin). Jeśli w badanym materiale znajdują się środki przeciwdrobnoustrojowe, należy je odpowiednio zneutralizować. Można to osiągnąć przez dodanie 0,1-1% środka neutralizującego, takiego jak polisorbat i / lub lecytyna, do bulionu regeneracyjnego. Poziom czynnika zobojętniającego wymagany dla każdego rodzaju próbki będzie musiał zostać wcześniej określony przy użyciu zalecanych szczepów kontrolnych.
Po odpowiednim czasie inkubacji część dowolnego bulionu dodatniego zaszczepia się w szeregu zalecanych pożywek selektywnych, które są odpowiednio inkubowane i badane pod kątem wzrostu bakterii. Dalsze testy są przeprowadzane na dowolnych koloniach obecnych na wybiórczych podłożach w celu potwierdzenia identyfikacji.
Technika
Postępuj zgodnie z metodami i procedurami określonymi w odpowiedniej standardowej metodzie. Płytki zazwyczaj zaszczepia się metodą smugi lub rozsiewu z nieselektywnego podłoża lub bezpośrednio z próbki. Inkubować płytki w temperaturze 35–37 ° C przez maksymalnie 48 godzin.
Kolonie Pseudomonas aeruginosa mają żółto-zielony lub żółto-brązowy kolor i fluoryzują w świetle UV. Domniemana identyfikacja za pomocą morfologii kolonialnej powinna zostać potwierdzona za pomocą dalszych testów, takich jak oksydaza i posiew na podłoże w celu wykrycia pirowerdyny i pirocyjaniny.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane podłoże: półprzezroczysty, jasny żel w kolorze słomy
