AGAR M17
Kod: CM0785
Dla lepszego wzrostu paciorkowców mlekowych i ich bakteriofagów oraz selektywnego zliczania Streptococcus thermophilus z jogurtu.
Typowa formuła * gm / litr
Tryptone 5.0
Pepton sojowy 5.0
Trawienie mięsa 5.0
Ekstrakt drożdżowy 2.5
Kwas askorbinowy 0,5
Siarczan magnezu 0,25
Glicerofosforan di-sodu 19,0
Agar 11,0
pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 48,25 g w 950 ml wody destylowanej i delikatnie doprowadzić do wrzenia. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Ochłodzić do 50 ° C i dodać 50 ml jałowego roztworu laktozy (10% w / v).
Roztwór laktozy 10% (m / v)
Rozpuść 10 g Laktozy Kod LP0070 w 100 ml wody destylowanej. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut lub przez filtrację membranową przez membranę 0,2 µm.
Opis
Agar M17 oparty jest na preparacie opisanym przez Terzaghi i Sandine1 i jest zalecany jako ulepszone podłoże do wzrostu i liczenia paciorkowców mlekowych i ich bakteriofagów.
Ponieważ wspiera lepszy wzrost gospodarza, pozwala na wykazanie zjawisk powszechnie związanych z innymi bakteryjnymi systemami wirusowymi, ale nie zgłoszonych wcześniej w przypadku fagów paciorkowców mlekowych i umożliwia szczegółowe badania morfologii płytki i lizogenezy.
Paciorkowce mlekowe są wybredne żywieniowo i wymagają złożonych pożywek dla optymalnego wzrostu2,3. Ich charakter homofermentacyjny wytwarzający kwas wymaga, aby pożywka była dobrze buforowana, tak aby pH hodowli było utrzymywane powyżej 5,7 podczas aktywnego wzrostu. To utrzymanie pH jest ważne, ponieważ niższe pH może spowodować uszkodzenie i zmniejszenie odzysku paciorkowców mlecznych.
M17 Agar zawiera glicerofosforan sodu, który ma wystarczającą zdolność buforowania, aby utrzymać pH powyżej 5,7 aktywnie rosnących kultur nawet po 24 godzinach w 30 ° C. Ten środek buforujący umożliwia także dodawanie wapnia bez tworzenia kompleksu strącającego. Pożywkę zawierającą wapń stosuje się do oznaczania bakteriofagów paciorkowców mlekowych1.
Shankar i Davies4 podali, że agar M17 był odpowiedni do izolacji i zliczania Streptococcus thermophilus z jogurtu, ponieważ wysokie stężenie glicerofosforanu di-sodu powodowało supresję Lactobacillus bulgaricus. Agar M17 został rekomendowany5,6 przez Międzynarodową Federację Mleczarską do selektywnego oznaczania Streptococcus thermophilus z jogurtu.
M17 Agar nadaje się również do uprawy i utrzymywania kultur startowych do produkcji sera i jogurtu, ponieważ ma niewielki szkodliwy wpływ na ich późniejszą zdolność do produkcji kwasu w mleku w temperaturze 30 ° C lub 22 ° C 1.
Kolejną użyteczną właściwością tego agaru jest jego zdolność do wykrywania mutantów paciorkowców, które nie są w stanie fermentować laktozy1. Te zmutowane szczepy Lac tworzą znacznie mniejsze kolonie niż macierzysty szczep fermentujący laktozę.
Technika
Test bakteriofagowy
Mikrobiolodzy pragnący zbadać aktywność fagów powinni zapoznać się z publikacją Terzaghi i Sandine1 w celu uzyskania kompleksowego opisu tej metody.
Do wyliczenia Streptococcus thermophilus w jogurcie
1. Wymieszaj lub wymieszaj próbkę jogurtu, aby uzyskać jednolitą homogeniczność.
2. Odważyć 10 ± 0,1 g badanej próbki do 200 ml okrągłodennej probówki wirówkowej wykonanej ze wzmocnionego szkła lub pojemnika mieszalnika mechanicznego.
3. Dodaj sterylny 0,1% (wag./obj.) Roztwór peptonu ‡ do próbki testowej, aż masa próbki testowej i rozcieńczalnika wyniesie 50 g.
4. Przygotuj odpowiednią serię dziesiętnych rozcieńczeń zawiesiny jogurtu w 9 ml objętościach sterylnego 0,1% (w / v) roztworu peptonu.
5. (i) Zaszczepić podwójne płytki agaru M17 za pomocą pętli z każdego rozcieńczenia i rozprowadzić, aby uzyskać pojedyncze kolonie.
(ii) Dodać podwójną porcję 1 ml rozcieńczenia do szalki Petriego i przygotować płytki do zalania 14 ml sterylnego agaru M17 schłodzonego do 43 ° C ± 1 ° C.
6. Inkubuj w temperaturze 35 ° C przez 48 godzin.
7. Zbadać płytki po 24 i 48 godzinach inkubacji. Kolonie Streptococcus thermophilus są widoczne po 18-24 godzinach, a po 48 godzinach inkubacji tworzą kolonie o średnicy 1-2 mm. Lactobacillus bulgaricus nie rośnie ani nie wytwarza bardzo ograniczonych kolonii.
8. Przeprowadzić zliczenia na płytkach zalewowych i wyrazić wyniki jako liczbę jednostek tworzących kolonie na gram próbki.
0,1% wody peptonowej6 można przygotować w następujący sposób:
LP0042 Tryptone 0,5 g
LP0049 Pepton 0,5 g
Woda destylowana 1 litr
Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.
Potwierdzenie
Kolonie izolowane z produktów mlecznych, które podejrzewa się, że są Streptococcus thermophilus, można potwierdzić za pomocą barwienia Grama (Gram-dodatnie ziarniaki) i testu katalazy (ujemnego).
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane podłoże przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: żel w kolorze słomy
