BRANŻA PRZESIEWOWA KRONOBAKTERA (CSB)
Nowy bulion wzbogacający do wykrywania Cronobacter (wcześniej E. sakazakii) z próbek żywności i próbek środowiskowych. Do stosowania w połączeniu z agarem Chromogenic Cronobacter Isolation (CCI) (CM1122)
KOD: CM1121
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 10,0
Ekstrakt z mięsa 3.0
Chlorek sodu 5.0
Fiolet bromokrezolowy 40 mg
Sacharoza 10,0
pH 7,4 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
SUPLEMENT WANKOMYCYNY (5 mg)
KOD: SR0247E
Zawartość fiolki: (każda fiolka wystarcza na 500 ml pożywki)
na fiolkę
na litr
Wankomycyna
5mg
10 mg
Kierunki
Rozpuścić 14,02 g w 500 ml wody destylowanej. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Ochłodzić do około 50 ° C i aseptycznie dodać zawartość 1 fiolki suplementu wankomycyny (5 mg) (SR0247E) odtworzonego zgodnie z zaleceniami. Dobrze wymieszaj i aseptycznie dozuj do sterylnych pojemników.
Opis
Cronobacter (dawniej Enterobacter sakazakii) to Gram-ujemni członkowie rodziny Enterobacteriaceae w kształcie pałeczek, którzy byli zamieszani w wybuchy choroby u wcześniaków (noworodków), powodując posocznicę, zapalenie opon mózgowych i martwicze zapalenie jelit. Uszkodzenie neurologiczne może być trwałe, a śmiertelność szacuje się na 40–80% 1.
Cronobacter spp. zostały wyizolowane na niskim poziomie ze sproszkowanych preparatów dla niemowląt, a wysoka tolerancja organizmów na suszenie zapewnia przewagę konkurencyjną w suchym otoczeniu fabryk mleka w proszku, zwiększając ryzyko zanieczyszczenia produktu2.
Ciągły rozwój nowej horyzontalnej standardowej metody CEN-ISO do wykrywania Cronobacter spp przez grupę ISO / TC 34, SC 9Ad hoc dla E. sakazakii, dotyczy takich kwestii, jak zakres metody, wiarygodność kryteriów identyfikacji i ulepszenia do mediów 1. W oczekiwaniu na te przyszłe potrzeby Oxoid wprowadził nowy bulion przesiewowy Cronobacter (CSB) (CM1121) i agar Chromogenic Cronobacter Isolation (CCI) (CM1122).
Bulion przesiewowy Cronobacter został specjalnie zaprojektowany przez Iversen i in. 3 do stosowania w połączeniu z podłożem chromogennym. Umożliwia identyfikację domniemanych próbek dodatnich pod względem Cronobacter przed etapem selektywnego wysiewu, a także pozwala na uwolnienie produktów ujemnych pod względem Cronobacter co najmniej 24 godziny wcześniej niż w przypadku innych standardowych metod. Uzyskuje się to poprzez włączenie sacharozy i wskaźnika pH purpury bromokrezolowej. Podczas gdy Cronobacter spp. może sfermentować sacharozę, większość innych Enterobacteriaceae, które rosną jako fałszywie dodatnie na agarach chromogennych, nie może. W konsekwencji żółto / pomarańczowe zabarwienie bulionu po inkubacji (z powodu fermentacji sacharozy) wskazuje na przypuszczalny Cronobacter. Jeśli po inkubacji bulion nadal ma kolor purpurowy, przyjmuje się, że próbka jest ujemna dla Cronobacter.
Technika
Przygotuj próbkę testową zgodnie z ISO 68874, ISO 82615 lub odpowiednią normą
Homogenizować x g próbki w 9 razy x ml buforowanej wody peptonowej ISO (CM1049)
Inkubować próbki w 37 ° C ± 1 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny
Przenieść 0,1 ml wzbogacenia do 10 ml CSB i inkubować w 41,5 ° C ± 1 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Jeśli bulion jest fioletowy, wynik jest negatywny i nie jest wymagana dalsza praca. Jeśli bulion jest żółty, przejdź do kroku 6.
Za pomocą 10 µl pętli nanieść na powierzchnię płytki agarowej CCI
Odwrócić i inkubować płytki w 41,5 ° C ± 1 ° C przez 24 godziny ± 2 godziny
Wybierz 1-5 niebieskich / zielonych kolonii do potwierdzenia
Rozsmaruj płytki na agarze tryptonowym z soi (CM0131) i inkubuj w 37 ° C ± 1 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny
Wykonaj wymagane testy biochemiczne
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie
Przygotowane podłoże przechowuj w temperaturze 2–8 ° C
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane podłoże: roztwór w kolorze fioletowym
