Chromogenic Enterobacter Sakazakii Agar, pożywka sypka

BRILLIANCE ENTEROBACTER SAKAZAKII AGAR (preparat DFI)

Kod: CM1055

Brilliance ™ Enterobacter sakazakii Agar (wcześniej Chromogenic Enterobacter sakazakii Agar) służy do różnicowania i liczenia Enterobacter sakazakii z mieszanki dla niemowląt i innych próbek żywności.

Typowa formuła * gm / litr

Tryptone 15,0

Pepton sojowy 5.0

Chlorek sodu 5.0

Cytrynian żelazowo-amonowy 1.0

Dezoksycholan sodu 1.0

Tiosiarczan sodu 1.0

Chromogen 0,1

Agar 15,0

Końcowe pH 7,3 ± 0,2 przy 25 ° C

* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia
Zawiesić 43,1 g agaru Brilliance Enterobacter sakazakii w 1 litrze wody destylowanej. Dobrze wymieszaj i doprowadzaj do wrzenia, aby całkowicie się rozpuściły. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut. Schłodzić medium do 50 ° C. Dobrze wymieszaj i przelej do sterylnych szalek Petriego.

Opis
Agar Brilliance Enterobacter sakazakii (preparat DFI 1) oparty jest na reakcji a-glukozydazy, którą wykrywa się przez wprowadzenie do podłoża chromogennego substratu 5-bromo-4-chloro-3-indolilo-a-D-glukopiranozydu. Enzym a-glukozydaza, obecny w Enterobacter sakazakii, hydrolizuje substrat tworząc niebiesko-zielone kolonie na tym jasnożółtym podłożu. Proteus vulgaris jest również słabo pozytywny pod względem a-glukozydazy i może rosnąć, dając kolonie o podobnym kolorze do E. sakazakii. Jednak na tym podłożu Proteus spp. rosną jako szare kolonie: wytwarzają siarkowodór w obecności jonów żelazowych tworzących siarczek żelazawy. Desoksycholan hamuje wzrost większości organizmów Gram-dodatnich.

Enterobacter sakazakii jest bakterią Gram-ujemną w kształcie pałeczki, która rzadko powoduje choroby u zdrowych osób dorosłych. Ma to wpływ na wybuch choroby u wcześniaków (noworodków). Badania sugerują, że noworodki lub te niemowlęta, które mają inne schorzenia, są bardziej podatne na tę infekcję. Najczęściej zgłaszane przypadki zakażenia są ciężkie, w tym posocznica (bakterie we krwi), zapalenie opon mózgowych lub martwicze zapalenie jelit (ciężkie zakażenie jelit). Uszkodzenie neurologiczne może być trwałe, a śmiertelność szacuje się na 40–80% 2.

Enterobacter sakazakii jest patogenem oportunistycznym, który został wyizolowany na niskim poziomie ze sproszkowanych preparatów dla niemowląt. Wysoka tolerancja organizmów na suszenie zapewnia przewagę konkurencyjną Enterobacter sakazakii w suchym środowisku, jak w fabrykach mleka w proszku, a tym samym zwiększa ryzyko zanieczyszczenia produktu końcowego po pasteryzacji3.

Obecna metoda FDA3 do wykrywania Enterobacter sakazakii opiera się na produkcji żółtego pigmentu i pochodzi z pionierskich prac Muytjensa i in.4. Próbki inkubowano w wodzie przez noc, a następnie wzbogacono w bulion EE (CM0317), a następnie posiano na VBRGA (CM0485) w celu wyizolowania Enterobacteriaceae. Pięć kolonii wybiera się i wysypuje pasmem na agarze tryptonowo-sojowym (CM0131), inkubuje przez okres do 3 dni i obserwuje pod kątem żółtych kolonii, typowych dla Enterobacter sakazakii. Jednak ta metoda nie wybiera Enterobacter sakazakii, a połączone zastosowanie bulionu EE i VRBGA może pozwolić innym Enterobacteria wyrosnąć z Enterobacter sakazakii i dać fałszywie ujemne wyniki. Nie można wybrać kolonii Enterobacter sakazakii z płytek VRBGA na podstawie morfologii kolonii, ponieważ będą one wyglądać tak samo jak inne Enterobacteria.

Technika
Uwaga: poniższe informacje to tylko sugerowana metoda użycia. Zapoznaj się z aktualnymi wytycznymi i zaleceniami.

Wykazano, że agar Oxoid Brilliance Enterobacter sakazakii zwiększa odzyskiwanie Enterobacter sakazakii ze sproszkowanej mieszanki dla niemowląt i innych próbek żywności, gdy stosuje się go w celu zastąpienia dwóch pożywek w metodzie FDA 20021.

Za pomocą pętli inokulacyjnej usuń 10 µl z inkubowanego bulionu EE i posmaruj lub rozprowadź na powierzchni płytki agarowej Brilliance Enterobacter sakazakii
Inkubuj płytkę w 35-37 ° C przez 24 godziny i obserwuj kolonie niebiesko-zielone
Potwierdź przypuszczalnie niebiesko-zielone kolonie jako Enterobacter sakazakii, biochemicznie. Można tego dokonać za pomocą systemów takich jak MicrobactTM 24E MB1131A lub MB1074A.
Warunki przechowywania i okres ważności
Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowaną pożywkę można przechowywać do 2 tygodni w temperaturze 2–8 ° C.

Wygląd
Odwodniony proszek: sypki proszek w kolorze słomy
Przygotowane podłoże: jasnożółty żel