ZMODYFIKOWANY PÓŁPŁYWNY AGAR RAPPAPORT VASSILIADIS (ISO)
Kod: CM1112
Zmodyfikowany półstały agar Rappaport-Vassiliadis (MSRV) (ISO) stosuje się do selektywnego wzbogacania Salmonella spp. z żywności, odchodów zwierzęcych i próbek środowiskowych z pierwotnego etapu produkcji zwierzęcej. To medium spełnia specyfikacje dotyczące receptury i działania opisane w ISO 6579: 2002 + A1: 2007 Załącznik D1.
Typowa formuła * gm / litr
Enzymatyczne trawienie tkanek zwierzęcych i roślinnych 4.6
Kwasowy hydrolizat kazeiny 4.6
Chlorek sodu 7.3
Diwodorofosforan potasu (KH2PO4) 1.5
Bezwodny chlorek magnezu (MgCl2) 10,9
Malachitowy zielony szczawian 0,04
Agar 2.7
pH 5,2 † (5,1 do 5,4) w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
pH suplementowanej pożywki
SUPLEMENT NOVOBIOCIN
Kod: SR0181
Zawartość fiolki (każda fiolka wystarcza na 1 litr medium)
na fiolkę/ na litr
Nowobiocyna
10 mg
10 mg
Kierunki
Zawiesić 31,6 g bazy agarowej MSRV (ISO) w 1 litrze wody destylowanej. Doprowadzaj do wrzenia z częstym mieszaniem. NIE AUTOCLAVE. Ochłodzić do 50 ° C i aseptycznie dodać zawartość 1 fiolki Suplementu Novobiocin (SR0181), odtworzonego zgodnie z zaleceniami. Dobrze wymieszaj i wlej do sterylnych szalek Petriego. To medium jest półstałe, dlatego nie odwracaj płyt.
Opis
Zmodyfikowany półstały agar Rappaport Vassiliadis (ISO) oparty jest na preparacie opisanym przez De Smedt i in., Dla którego wykazano, że wykrywa więcej próbek dodatnich pod względem Salmonelli niż tradycyjne procedury wzbogacania2,3. Dalsze wspólne badania potwierdziły te ustalenia4,5.
Wzbogacanie ruchliwości na agarze MSRV zaprojektowano jako prostą i czułą metodę izolacji salmonelli z próbek żywności i próbek środowiskowych. Został on włączony do załącznika D1 ISO 6579: 2002 + A1: 2007, który ma zastosowanie do izolacji Salmonella spp. z odchodów zwierzęcych (takich jak drób, świnie i bydło) i próbek środowiskowych związanych z pierwotnym etapem produkcji zwierzęcej (takim jak kurz). W załączniku D agar MSRV zastępuje bulion Rappaport-Vassiliadis, który jest nadal stosowany w ISO 6579: 2002 + A1: 2007 do selektywnego wzbogacania Salmonella spp. w jedzeniu.
Wydajność pożywki opiera się na zdolności migracji salmonelli przez pożywkę selekcyjną przed konkurencyjnymi organizmami Gram-ujemnymi, ruchliwymi, wytwarzając w ten sposób nieprzezroczyste halo wzrostu. Nowobiocyna, niskie pH, wysokie stężenie chlorku magnezu i zieleń malachitu hamują wzrost flory Gram-dodatniej.
Subkulturę należy przeprowadzić z migrowanej kultury, a inokulum należy pobrać z najdalszej krawędzi wzrostu. Domniemaną identyfikację osiąga się przez subkulturę na agarze XLD i drugim wybranym agarze Salmonella. Charakterystyczne domniemane kolonie Salmonelli powinny zostać potwierdzone zgodnie ze wskazówkami w ISO 6579: 2002 + A1: 2007, załącznik D1. Alternatywnie można zastosować test lateksowy Oxoid Salmonella FT0203 lub DR1108 do potwierdzenia serologicznego Salmonella spp. Agar MSRV (ISO) nie nadaje się do wykrywania nieruchliwych szczepów Salmonelli (częstość kliniczna <0,1%) 6.
Technika
Szczegółowe instrukcje znajdują się w odpowiedniej standardowej metodzie. Poniższa metoda jest streszczeniem normy ISO 6579: 2002 + A1: 2007.
Przygotuj próbki zgodnie z odpowiednią normą.
Dodaj 25 g próbki do 225 ml buforowanej wody peptonowej (ISO) (CM1049) i homogenizuj przez 30 sekund.
Inkubować w 37 ° C przez 18 godzin ± 2 godziny.
Zaszczepić płytki MSRV 3 kroplami wstępnie inkubowanej hodowli BPW o łącznej wartości 0,1 ml, równo rozłożonymi na pożywce.
Inkubować płytki w 41,5 ° C przez 24 godziny ± 3 godziny.
Kolonie ruchliwych Salmonelli charakteryzują się białymi / szarymi, mętnymi strefami promieniującymi od miejsca zaszczepienia. Strefy otoczone są białym halo z ostro zarysowaną ramką.
Jeśli płytki są ujemne po 24 godzinach, należy je ponownie inkubować przez kolejne 24 godziny ± 3 godziny.
Wybierz obszar strefy najdalej od miejsca zaszczepienia i próbkę sterylną pętlą o pojemności 1 µl.
Próbka smugi na agar dezoksycholanu lizyny lizyny (CM0469) i drugie podłoże selektywne, takie jak Agar Salillella Brilliance ™ (CM1092).
Inkubować w 37 ° C przez 18 godzin ± 3 godziny.
Kolonie można hodować na podłożu Nutrient Agar (CM0003) w celu potwierdzenia czystości i przeprowadzenia dalszych testów biochemicznych i serologicznych.
Warunki przechowywania i okres ważności
MSRV (ISO) należy przechowywać w szczelnie zamkniętym oryginalnym pojemniku w temperaturze 10–30 ° C. Suplement nowobiocyny należy przechowywać w ciemności w temperaturze 2-8 ° C. W przypadku przechowywania zgodnie z zaleceniami, nieotwarte produkty pozostaną stabilne do daty ważności wydrukowanej na opakowaniu.
Lokalnie przygotowane płytki MSRV (ISO) mogą być przechowywane do 2 tygodni, jeśli są wykonane z CM1112 i SR0181 zgodnie z instrukcjami producenta i przechowywane w temperaturze 2-8 ° C, z dala od bezpośredniego światła słonecznego. Dłuższy okres trwałości może być osiągalny, ale należy go zweryfikować zgodnie z odpowiednimi lokalnymi instrukcjami dotyczącymi produkcji i przechowywania.
Wygląd
Odwodniona pożywka hodowlana: niebieski / zielony, sypki proszek
Dodatek selektywny: biały, liofilizowany granulat
Przygotowane podłoże: niebieski, półstały żel
