MRS Agar, pożywka sypka

MRS AGAR (DE MAN, ROGOSA, SHARPE)

Kod: CM0361

Zestalona wersja bulionu MRS do hodowli „bakterii kwasu mlekowego”.

Typowa formuła * gm / litr

Pepton 10,0

Proszek „Lab-Lemco” 8.0

Ekstrakt drożdżowy 4.0

Glukoza 20,0

Mono-oleinian sorbitanu 1 ml

Wodorofosforan dipotasowy 2.0

Octan sodu 3H2O 5.0

Cytrynian triamonu 2.0

Siarczan magnezu 7H2O 0.2

Siarczan manganu 4H2O 0,05

Agar 10,0

pH 6,2 ± 0,2 @ 25 ° C

 * Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności

Sposób użycia 
Zawiesić 62 g w 1 litrze wody destylowanej. Zagotuj, aby całkowicie rozpuścić medium. Nalej do probówek, butelek lub kolb i sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Opis
Formuła MRS została opracowana przez de Mana, Rogosę i Sharpe1, aby zastąpić produkt zmienny (sok pomidorowy), a jednocześnie zapewnić pożywkę, która wspierałaby ogólnie dobry rozwój bakterii mlekowych, nawet tych szczepów, które wykazywały słaby wzrost w istniejących głoska bezdźwięczna. Pożywka MRS jest lepsza niż pożywka z soku pomidorowego Briggs2 i pożywka z soku pomidorowego z ekstraktu mięsnego de Man. Daje bardziej obfity wzrost wszystkich szczepów bakterii mlekowych, zwłaszcza trudnych i wolno rosnących szczepów Lactobacillus brevis i Lactobacillus fermenti.

Agar i bulion MRS zostały zaprojektowane w celu pobudzenia wzrostu bakterii kwasu mlekowego, które obejmują gatunki z następujących rodzajów: Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus i Leuconostoc. Wszystkie te gatunki mogą wytwarzać kwas mlekowy w znacznych ilościach. Są Gram-dodatnie, ujemne pod względem katalazy i oksydazy i są wybredne w zakresie wymagań żywieniowych. Wzrost jest znacznie poprawiony przez warunki mikroaerobowe. Ogólnie rzecz biorąc, bakterie kwasu mlekowego wykazują opóźniony wzrost i mniejszy rozmiar kolonii niż inne mikroorganizmy. Mogą być zarośnięte w nieselektywnych mediach, szczególnie jeśli wymagana jest inkubacja przez 2-4 dni.

Pożywka MRS jest wybiórcza dla bakterii mlekowych, ale może wystąpić pewien wzrost leukonostoków i pediokoków. Selektywność można zmienić przez dostosowanie pH. Lactobacilli będą tolerować niższe poziomy pH niż paciorkowce (pH 5,0-6,5), przy czym pediokoki i leukonostoki rosną najlepiej w tym zakresie. Inhibitory głównych grup konkurencyjnej mikroflory obejmują octan talowy, octan sodu, kwas sorbinowy, kwas octowy, azotyn sodu, cykloheksymid i polimyksynę. Substancje te można stosować w różnych stężeniach i kombinacjach, ale nieuchronnie trzeba osiągnąć kompromis między selektywnością a produktywnością poszukiwanego organizmu (-ów) 3. Agar MRS z kwasem sorbinowym został opisany3,4. Jest to pożywka MRS o pH obniżonym do 5,7 i dodanym 0,14% kwasu sorbinowego (co odpowiada 0,2% sorbinianu potasu).

Ocena pożywek do selektywnego zliczania gatunków Lactobacillus acidophilus i Bifidobacterium wykazała, że ​​można z łatwością dokonać drobnych korekt w podstawowej formule agaru MRS w celu zoptymalizowania jego wydajności do określania zawartości Lactobacillus acidophilus i Bifidobacterium spp. w obecności innych bakterii kwasu mlekowego, które są obecne w jogurcie5.

Lactobacilli są mikroaerofilne i na ogół wymagają płytek warstwowych do hodowli tlenowej na podłożach stałych. Zanurzone lub powierzchniowe kolonie mogą być zwarte lub pierzaste i są małe, nieprzezroczyste i białe.

Technika
1. Produkty, które mają być badane pod kątem zawartości kwasu mlekowego, maceruje się lub rozcieńcza w rozcieńczalniku, takim jak roztwór Ringera o ćwiartce mocy, a dalsze rozcieńczenia sporządza się w bulionie MRS.
2. Rozcieńczoną próbkę w objętości 1 ml dodaje się do jałowych naczyń, a roztopiony agar MRS (45 ° C) wlewa się do naczynia i dokładnie miesza.
3. Gdy podłoże się zestali, kolejną warstwę niezaszczepionego agaru MRS wylewa się na powierzchnię w celu wytworzenia płytki warstwowej.
4. Płytki inkubuje się jak opisano poniżej. Ważne jest, aby odpowiednia para wilgoci była obecna w atmosferze nad agarem, ponieważ suszenie płytek podczas inkubacji skoncentruje selektywne czynniki na powierzchni i spowoduje, że podłoże będzie hamujące. Obecność dwutlenku węgla stymuluje wzrost, a płytki należy inkubować w atmosferze 5% CO2.

Metoda inkubacji
42 ° C termofilny: 2 dni
35 ° C mezofilny: 2 dni
30 ° C + 22 ° C mezofilny-psychrotroficzny 2 + 1 dni
25 ° C psychrotroficzne: 3 dni
Inkubacja przeprowadzana w warunkach beztlenowych lub mikroaerofilowych
Aby zidentyfikować przypuszczalne kolonie Lactobacillus, wybierz izolowane kolonie na pożywce agarowej. Z każdego z nich zabrudzony rozmaz i osobno wybierz bulion MRS (CM0359). Zaletą tego bulionu jest to, że żadne inne mikroorganizmy, pierwotnie leżące w stanie uśpienia w selektywnym agarze, nie mają możliwości namnażania się, co może wystąpić w nieselektywnym bulionie. Inkubować buliony w temperaturach i czasach podobnych do tych stosowanych w agarze MRS; można je następnie badać mikroskopowo i dalej hodować na agarze MRS w celu późniejszego potwierdzenia i identyfikacji gatunków.

Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.