AGAR MLCB
Kod: CM0783
Fioletowy zielony agar z mannitolem lizynowym, brylantowym do izolacji salmonelli (nie Salmonella typhi ani Salmonella paratyphi A.).
Typowa formuła * gm / litr
Ekstrakt drożdżowy 5.0
Pepton 10,0
Proszek „Lab-Lemco” 2.0
Chlorek sodu 4.0
Mannitol 3.0
Chlorowodorek L-lizyny 5.0
Tiosiarczan sodu 4.0
Cytrynian amniowo-żelazowy (III) 1.0
Brilliant Green 0,0125
Krystaliczny fiolet 0,01
Agar 15,0
pH 6,8 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 49,0 g w 1 litrze wody destylowanej. Wymieszaj i delikatnie zagotuj z częstym mieszaniem, aby całkowicie rozpuścić środowisko. Ochłodzić do 50 ° C i wlać około 20 ml do sterylnych szalek Petriego.
NIE UŻYWAJ W autoklawie ani nie przegrzewaj.
Opis
Fioletowy zielony agar z mannitolem lizynowym i fioletowym (agar MLCB) oparty jest na wzorze Inoue i in. 1 do selektywnej izolacji salmonelli z kału i żywności. Wizualne wykrywanie bardzo małej liczby szczepów wytwarzających siarkowodór jest łatwe ze względu na charakterystyczny kolonialny wygląd.
Stężenie jonów magnezu wydaje się mieć decydujące znaczenie dla maksymalnego wzrostu salmonelli na agarze MLCB. van Schothorst i wsp.2 wykazali, że agar Oxoid MLCB nie hamował żadnego z badanych gatunków salmonelli.
Serotypy Salmonella, które mają wysoką częstość występowania szczepów ujemnych względem H2S, np. Salmonella sendai, Salmonella berta, Salmonella pullorum i Salmonella senftenberg mogą wytwarzać nietypowe blade kolonie. Agar MLCB nie nadaje się do Salmonella typhi i Salmonella paratyphi A ze względu na hamujące stężenie jaskrawej zieleni.
Pożywkę można zaszczepić bezpośrednio próbką lub kulturą wzbogacania. Selektywność jest stosunkowo słaba i na jej działanie mogą niekorzystnie wpływać silnie zanieczyszczone próbki. Z powodu tych ograniczeń agaru MLCB nie należy stosować samodzielnie.
Agar MLCB określono jako podłoże do posiewu po wzbogaceniu w zmodyfikowanym półstałym Rappaport Vassiliadis (MSRV) CM0910 do izolacji Salmonella spp. z ludzkiego kału 3.
Van Schothorst i wsp. 2 podali, że agar MLCB doskonale nadaje się do izolacji salmonelli pozytywnych pod względem H2S po wzbogaceniu w bulionie wzbogacającym Rappaport-Vassiliadis (RV) CM0669. Stwierdzono, że selektywność agaru MLCB znacznie wzrosła po wzbogaceniu bulionu RV. Zasugerowali, że do badania silnie zanieczyszczonych próbek należy stosować Brilliant Green Agar i MLCB Agar.
Salmonelli rosną jako duże fioletowo-czarne kolonie z powodu produkcji siarkowodoru. Mannitol jest wykorzystywany przez organizm, a powstały spadek pH inicjuje dekarboksylację lizyny, która kontroluje dalszy ruch pH w dół i sprzyja czernieniu.
Agar MLCB nie zależy od fermentacji laktozy i dlatego jest zalecany do badania salmonelli fermentujących laktozę (Salmonella arizona).
Nietypowe szczepy Salmonelli, które wytwarzają niewiele siarkowodoru lub nie wytwarzają go wcale, rosną w postaci fioletowo-szarych kolonii i mogą rozwinąć centralne czarne „oko byka”.
Aby pomóc w wykryciu tych nietypowych szczepów, należy również użyć Brilliant Green Agar (zmodyfikowany) CM0329 lub Bismuth Sulphite Agar CM0201.
Organizmy Gram-dodatnie i większość Gram-ujemnych są hamowane, chociaż niektóre szczepy Citrobacter spp. może rosnąć wystarczająco dobrze, aby naśladować wygląd Salmonella spp. i trochę Proteus spp. może rój.
Większość organizmów zanieczyszczających, które są w stanie rosnąć, rozwija się jako małe bezbarwne kolonie.
Technika
Przed użyciem osusz powierzchnię agaru.
Obficie zaszczepić pożywkę próbką lub kulturą wzbogacania i inkubować przez 18–24 godzin w temperaturze 35 ° C.
Zbadaj typowe duże fioletowo-czarne kolonie salmonelli H2S-dodatniej. Poszukaj uważnie szczepów ujemnych H2S, które nietypowo rosną jako duże fioletowo-szare kolonie z kraterowym centrum. Część może pokazywać czarne „oko byka”.
Wybierz wszystkie kolonie, które są rzekomo Salmonella spp. i potwierdź testami biochemicznymi i serologicznymi.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki z medium przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy / zielony, sypki proszek
Przygotowane medium: żel o fioletowym kolorze
