AGAR SULFITOWY BISMUTH
Kod: CM0201
Modyfikacja oryginalnego podłoża Wilsona i Blaira do izolacji Salmonella typhi i innych salmonelli. Jest szczególnie przydatny do izolacji salmonelli fermentujących laktozę.
Typowa formuła * gm / litr
Pepton 5.0
Proszek „Lab-Lemco” 5.0
Glukoza 5.0
Fosforan disodowy 4.0
Siarczan żelazawy 0,3
Wskaźnik siarczynu bizmutu 8.0
Brilliant Green 0,016
Agar 12,7
pH 7,6 ± 0,2 przy 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
Sposób użycia
Zawiesić 20 g w 500 ml wody destylowanej w 1-litrowej kolbie. Ogrzewać delikatnie z częstym mieszaniem, aż podłoże zacznie wrzeć i gotować na wolnym ogniu przez 30 sekund, aby rozpuścić agar. Ochłodzić do 50-55 ° C, dobrze wymieszać w celu zdyspergowania zawiesiny i wlać grube płytki (25 ml pożywki na płytkę). Pozostawić podłoże do zestalenia się z odkrytym naczyniem. Większe objętości można przygotować, jeśli zachowa się dużą ostrożność i zapewni się odpowiednią przestrzeń na głowę.
Przed użyciem osusz talerze, ale uważaj, aby nie do przesuszenia. Prawidłowo przygotowane talerze powinny mieć gładkie, kremowe krycie o jasnym słomkowym kolorze. Wskaźnik nie powinien wykazywać sedymentacji.
NIE PRZEGRZAĆ - NIE AUTOCLAVE
Opis
Agar z siarczynem bizmutu jest modyfikacją oryginalnego podłoża selektywnego Wilsona i Blair1 do izolacji i wstępnej identyfikacji Salmonella typhi i innych salmonelli z materiału patologicznego, ścieków, zasobów wodnych, żywności i innych produktów podejrzewanych o to, że zawierają te patogeny. W tym podłożu świeżo wytrącony siarczyn bizmutu działa razem z jaskrawą zielenią jako środek wybiórczy, hamując wzrost bakterii z grupy coli, jednocześnie umożliwiając wzrost salmonelli. Związki siarki stanowią substrat do produkcji siarkowodoru, podczas gdy sole metaliczne w pożywce zabarwiają kolonię i otaczające ją medium w kolorze czarnym lub brązowym w obecności siarkowodoru.
Nietypowe kolonie mogą pojawić się, jeśli podłoże jest silnie zaszczepione materią organiczną. Takiej sytuacji można zapobiec, zawieszając próbkę w sterylnej solance i stosując supernatant do zaszczepienia.
Świeżo przygotowane podłoże ma silne działanie hamujące2 i jest odpowiednie dla mocno zanieczyszczonych próbek. Przechowywanie wylanych płytek w 4 ° C przez 3 dni powoduje, że podłoże zmienia kolor na zielony, co czyni go mniej selektywnym przy odzyskiwaniu niewielkiej liczby salmonelli3. Jednak w przypadku odzyskiwania Salmonella typhi ta ostatnia technika nie jest zalecana 4.
Tam, gdzie spodziewana jest niewielka liczba salmonelli, można zastosować metody wzbogacania. Stosowanie tego medium jest popierane przez kilka organów5,6,7, 7.
Technika
Agar z siarczynem bizmutu można stosować w połączeniu z innymi selektywnymi agarami dojelitowymi do izolacji salmonelli przez bezpośrednie posiewanie lub z pożywek wzbogacających8. W ten sposób można przyjąć następujący schemat.
Zaszczepić bezpośrednio agar siarczynowy bizmutu i jedną lub więcej z poniższych:
Agar cytrynian dezoksycholanu CM0227 lub Agar DCLS CM0393
Agar XLD CM0469
Genialny zielony agar CM0329
Agar MacConkey nr 3 CM0115
Jednocześnie zaszczepić bulion wzbogacający, taki jak Selenite Broth Base CM0395 + Sodium Biselenite LP0121, Mueller-Kauffmann Tetrathionate Bulion CM0343 lub Mueller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin Broth (MKTT-n) CM1048. Podhodowle na agar siarczynowy bizmutu i dowolne inne pożywki po 12–18 godzinach inkubacji. Zbadaj płytki po 18 godzinach inkubacji i podejmij kolonie podejrzane o podłoże identyfikacyjne, np. Klarler Iron Agar CM0033.
Wszystkie płytki ujemne należy inkubować przez 48 godzin.
Salmonella typhi
Wygląd
Czarne kolonie „królikowatych oczu” z czarną strefą i metalicznym połyskiem otaczające kolonię po 18 godzinach. Jednorodnie czarny po 48 godzinach inkubacji.
Inne gatunki Salmonella
Wygląd
Zmienny wygląd kolonii po 18 godzinach, mogą być czarne, zielone lub przezroczyste i śluzowate. Jednorodnie czarne kolonie obserwuje się po 48 godzinach, często z szeroko rozpowszechnionym zabarwieniem podłoża i wyraźnym metalicznym połyskiem.
Inne organizmy, np. bakterie z grupy coli, Serratia, gatunki Proteus
Wygląd
Zazwyczaj hamowane, ale okazjonalne szczepy dają matowe zielone lub brązowe kolonie bez metalicznego połysku lub zabarwienia otaczającego środowiska.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie. Zwróć uwagę na następujące komentarze:
Ze względu na zawartość substancji reaktywnych i higroskopijnych odwodniony agar siarczynowy bizmutu szybko ulega zniszczeniu po wystawieniu na działanie atmosfery. Zazwyczaj jest to wskazywane przez agregację w stałą niesypalną masę i przez pojawienie się brązowego zabarwienia. Pożywka odtworzona z takiego materiału jest brązowa, nie zmienia koloru na zielony podczas przechowywania i charakteryzuje się utratą właściwości różnicowych i selektywnych. Z tego powodu proszek należy przechowywać w chłodnym, suchym miejscu, a po użyciu pojemnik powinien być odpowiednio zamknięty.
Przygotowane medium
Przygotowane płytki nie powinny być przechowywane dłużej niż dwa dni w temperaturze 2-8 ° C, po czym brylantowy zielony o
