PODSTAWA AGAROWA KF STREPTOCOCCUS
Kod: CM0701
selektywne podłoże do izolacji i zliczania enterokoków
Typowa formuła * gm / litr
Pepton proteinowy 10,0
Ekstrakt drożdżowy 10,0
Chlorek sodu 5.0
Glicerofosforan sodu 10,0
Maltoza 20,0
Laktoza 1.0
Azydku sodowego 0,4
Fiolet bromo-krezolowy 0,015
Agar 20,0
pH 7,2 ± 0,2 w 25 ° C
* Dostosowane zgodnie z wymaganiami w celu spełnienia standardów wydajności
ROZWIĄZANIE TTC (1%)
Kod: SR0229
Zawartość fiolki (każda fiolka wystarcza na 500 ml pożywki)
Chlorek 2,3,5-trifenylotetrazoliowy (1%) 5 ml
Sposób użycia
Zawiesić 38,2 g w 500 ml wody destylowanej. Doprowadzaj do wrzenia z częstym mieszaniem. Gotować przez 5 minut. Ochłodzić do 50 ° C i dodać aseptycznie 1 fiolkę (5 ml) 1% chlorku 2,3,5-trifenylotetrazoliowego (SR0229K). Wlać do sterylnych szalek Petriego, stosując metodę filtracji membranowej, lub trzymać w temperaturze 45 ° C, stosując metodę płytek do nalewania.
Opis
Agar KF Streptococcus oparty jest na preparacie opisanym przez Kennera i in. 1 i jest zalecany2 do wykrywania i oznaczania liczby enterokoków w kale, mleku, wodzie i innych materiałach metodą filtracyjną lub filtracji membranowej. Obecność enterokoków w badanym materiale wskazuje na zanieczyszczenie kałem przez człowieka lub zwierzęta.
Podłoże agarowe Streptococcus KF jest selektywne dla następujących gatunków z grupy D i grupy Q.
Grupa Enterococcus
Enterococcus faecalis
Grupa D
Enterococcus subsp. upłynniacze
Grupa D
Enterococcus faecalis subsp. zymogenes
Grupa D
Enterococcus faecium
Grupa D
Enterococcus bovis
Grupa D
Enterococcus equinus
Grupa D
Streptococcus avium
Grupa Q
Streptococcus avium (Grupa Q) został włączony do grupy „enterokoków”, ponieważ ma bardzo podobne właściwości biochemiczne i antygenowe do gatunków z grupy D, a także występuje u zwierząt ciepłokrwistych.
Wykrywanie enterokoków może dostarczyć bardziej szczegółowych informacji o źródle zanieczyszczenia, ponieważ niektóre enterokoki są specyficzne dla gospodarza. Na przykład przewaga Enterococcus bovis i Enterococcus equinus wskazywałaby na zanieczyszczenie z powodu odchodów zwierząt.
Stwierdzono, że wykrywanie gatunków Enterococcus bovis i Enterococcus equinus wiąże się z zanieczyszczeniem obejmującym zakłady przetwórstwa mięsnego, odpady mleczne, paszę i spływ ziemi uprawnej.
Wykrywanie tych gatunków enterokoków wskazuje na niedawne zanieczyszczenie, ponieważ organizmy przeżywają tylko przez krótki okres poza ich naturalnym środowiskiem. Współczynniki bakterii coli / enterokoków mogą również dostarczać informacji o możliwych źródłach zanieczyszczenia2.
Oceniając jakość morskich wód rekreacyjnych, szczególnie w klimacie tropikalnym, należy zachować ostrożność, ponieważ może wystąpić wysoka częstość fałszywie dodatnich domniemanych liczby enterokoków. Zalecana jest beztlenowa inkubacja próbek tropikalnej wody morskiej3.
Kolonie enterokoków na filtrze membranowym lub płytce agarowej są czerwone lub różowe, a ich średnica waha się od 0,3 do 2 mm. Zaleca się, aby zliczanie odbywało się za pomocą lornetkowego mikroskopu do szerokiego pola o niskiej mocy (powiększenie 10-15) lub równoważnego urządzenia optycznego.
Technika
Technika filtracji membranowej
Przygotuj podłoże agarowe KF Streptococcus zgodnie z zaleceniami.
Przesączyć próbki przez sterylną membranę, aby uzyskać 20-100 kolonii na powierzchni membrany. Użyj objętości 100, 10, 1, 0,1 lub 0,01 ml, w zależności od stopnia zanieczyszczenia.
Przenieś filtr membranowy bezpośrednio na pożywkę agarową na płytkach Petriego, unikając tworzenia się pęcherzyków powietrza.
Odwrócić płytki i inkubować w temperaturze 35 ° C przez 48 godzin.
Policz wszystkie czerwone lub różowe kolonie za pomocą lornetkowego mikroskopu szerokokątnego o niskiej mocy (powiększenie 10-15).
Oblicz liczbę enterokoków i zgłoś jako paciorkowce kałowe na 100 ml.
Potwierdź kolonie jako enterokoki.
Metoda zliczania płytek
Przygotuj podłoże agarowe KF Streptococcus zgodnie z zaleceniami.
Przygotuj rozcieńczenia, aby uzyskać liczbę 30–300 kolonii. W przypadku większości próbek wody pitnej płytki odpowiednie do zliczania zostaną uzyskane przez zaszczepienie 1 ml i 0,1 ml nierozcieńczonej próbki i 1 ml próbki rozcieńczonej 1: 100.
Zmierz wybraną objętość próbki na szalce Petriego.
Wlać 15 ml skroplonego medium do każdej płytki.
Dokładnie wymieszaj pożywkę i próbkę, aby uzyskać jednorodną dyspersję organizmów.
Zestal agar tak szybko, jak to możliwe po wylaniu
Inkubować płytki w pozycji odwróconej w 35 ° C przez 48 godzin.
Policz wszystkie kolonie powierzchniowe i podpowierzchniowe od czerwieni do różu.
Oblicz liczbę enterokoków i zgłoś jako paciorkowce kałowe na 100 ml.
Potwierdź kolonie jako enterococci2. Użyj drutu do posiewu, aby przeszyć agar i dotrzeć do kolonii.
Warunki przechowywania i okres ważności
Przechowywać odwodnione podłoże w temperaturze 10–30 ° C i użyć przed datą ważności na etykiecie.
Przygotowane płytki przechowuj w temperaturze 2–8 ° C.
Wygląd
Medium odwodnione: słomy, sypki proszek
Przygotowane medium: żel o fioletowym kolorze
